3-羥基苯甲醛抑制兔自體移植靜脈橋內(nèi)膜增生的研究
本文選題:3-羥基苯甲醛 + 靜脈橋; 參考:《廣西醫(yī)科大學》2017年碩士論文
【摘要】:研究背景及目的心血管疾病是最常見的疾病病種,冠心病是心血管疾病重要的組成部分,也是心血管疾病中最常見的死因。對于嚴重的冠心病,冠狀動脈旁路移植術是其主要的治療方法。外科手術常用的取材有兩種:左乳內(nèi)動脈和大隱靜脈。相較于乳內(nèi)動脈血管橋的較好的遠期通暢率,大隱靜脈血管橋遠期通暢率不容樂觀。3-羥基苯甲醛(3-HBA)是一種原兒茶醛的前體,有研究表明原兒茶醛類物質(zhì)有心血管保護作用。但并無3-HBA對靜脈橋作用的研究。本實驗通過研究3-HBA對人大隱靜脈血管平滑肌細胞及兔自體移植靜脈橋內(nèi)膜增生的影響,以其尋找一種新的能夠防治冠狀動脈旁路移植術后靜脈橋狹窄的藥物。研究方法1.人大隱靜脈平滑肌細胞進行體外培養(yǎng),設立對照組,以及藥物梯度組(25,50,100μmol/L),作用人大隱靜脈平滑肌細胞24h后,用MTT法檢測細胞增殖情況,Transwell小室法檢測細胞遷移情況,流式細胞儀(Flow Cytometry,FCM)檢測細胞凋亡情況,Western Blot檢測p-AKT蛋白表達情況。2.選取24只健康的實驗用新西蘭兔,不限雌雄,體重在2000g-2500g之間,編號,計算機隨機法分成實驗組A組和對照組B組,每組再均分為兩個亞組,即A1、A2組和B1、B2組,每個亞組6只兔子,建立同側頸外靜脈移植到頸總動脈的實驗動物模型,A組動物從耳緣靜脈注射3-HBA 100mg/(kgd),B組動物給予同劑量生理鹽水以作對照。給藥時間一直持續(xù)至取材前一天。A1、B1組動物于模型建立后的第2周采集移植靜脈橋,A2、B2組動物于模型建立后4周采集移植靜脈橋,計算機圖形軟件計算靜脈橋內(nèi)膜厚度,并用蛋白印記法(Western Blot)對各組移植靜脈橋中AKT蛋白的磷酸化情況進行檢測。結果1.藥物干預人大隱靜脈平滑肌細胞24h后,相比于對照組,實驗組細胞增殖與遷移能力均受到明顯抑制,并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性,流式細胞儀凋亡檢測發(fā)現(xiàn)其中晚期凋亡細胞比例明顯增加,Western blot實驗發(fā)現(xiàn)p-AKT表達明顯減少,p0.05,差異均有統(tǒng)計學意義。2.24只兔子行搭橋模型成功,無明顯的手術切口感染。術后2周時,實驗組A1組靜脈橋內(nèi)膜厚度為76.57±6.76μm,而同期對照組B1組靜脈橋內(nèi)膜厚度為87.32±6.89μm,實驗組組靜脈橋內(nèi)膜厚度較對照組已經(jīng)稍有減小,p=0.123,差異無統(tǒng)計學意義;到4周時,實驗組A2內(nèi)膜厚度為45.39±9.41μm,對照組B2組內(nèi)膜厚度為134.07±18.80μm,p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。無論2周或者4周時,p-AKT的表達量實驗組組均較對照組均明顯降低,p0.05,差異有統(tǒng)計意義。結論3-羥基苯甲醛能抑制實驗用新西蘭兔自體移植靜脈橋內(nèi)膜增生,可能與其抑制AKT的磷酸化從而抑制平滑肌細胞增殖遷移以及促進VSMC凋亡有關。
[Abstract]:Background and objective Cardiovascular disease is the most common disease. Coronary heart disease is an important part of cardiovascular disease and the most common cause of death in cardiovascular disease.Coronary artery bypass grafting is the main treatment for severe coronary heart disease.There are two commonly used materials for surgery: the left internal mammary artery and the great saphenous vein.But there was no study of the effect of 3-HBA on venous bridge.The aim of this study was to investigate the effects of 3-HBA on intimal hyperplasia of vascular smooth muscle cells of human saphenous vein and autograft vein graft in rabbits in order to find a new drug to prevent and treat the stenosis of vein graft after coronary artery bypass grafting (CABG).Method 1.Human saphenous vein smooth muscle cells were cultured in vitro. Control group and drug gradient group (2550100 渭 mol / L) were used to detect cell proliferation and cell migration by MTT assay.Flow Cytometry (FCM) was used to detect apoptosis. Western Blot was used to detect the expression of p-AKT protein.Twenty-four healthy New Zealand rabbits were randomly divided into experimental group A and control group B, each group was divided into two subgroups: A1A 2 group and B 1 B 2 group, with 6 rabbits in each subgroup.An experimental animal model of ipsilateral external jugular vein transplantation to the common carotid artery was established. The animals of group A were injected with 3-HBA 100mg / kg / kg 3-HBA from the auricular margin to control the rats in group B with the same dose of normal saline.The administration time lasted until the first day before the drug was taken. Group A _ (1) B _ (1) collected the grafted vein grafts 4 weeks after the establishment of the model, and the thickness of the vein grafts was calculated by computer graphics software, and the thickness of the vein grafts was calculated by computer graphics software in the second week after the establishment of the model.The phosphorylation of AKT protein in vein grafts was detected by Western blot.Result 1.Compared with the control group, the proliferation and migration ability of the experimental group were significantly inhibited after 24 hours of drug intervention, and in a dose-dependent manner.The proportion of late apoptotic cells was significantly increased by flow cytometry. Western blot assay showed that the expression of p-AKT decreased significantly (P 0.05), and the difference was statistically significant. 2.24 rabbits were successful in bypass grafting model, and there was no obvious wound infection.At 2 weeks after operation, the intimal thickness of venous grafts was 76.57 鹵6.76 渭 m in group A1 and 87.32 鹵6.89 渭 m in group B1, respectively.The intimal thickness of experimental group A2 was 45.39 鹵9.41 渭 m, and that of control group B2 was 134.07 鹵18.80 渭 m (p0.05).The expression of p-AKT in the experimental group was significantly lower than that in the control group at 2 or 4 weeks, and the difference was statistically significant.Conclusion 3-hydroxybenzaldehyde can inhibit the proliferation of autografted vein graft intima in New Zealand rabbits, which may be related to the inhibition of AKT phosphorylation, the inhibition of smooth muscle cell proliferation and migration, and the promotion of VSMC apoptosis.
【學位授予單位】:廣西醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2017
【分類號】:R654.2
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,本文編號:1731963
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