目的:驗證脫氧膽酸鈉(SD)對脂肪細胞的溶解作用,研究脫氧膽酸鈉(SD)在微血管內(nèi)皮細胞凋亡中的影響,為減少SD溶脂過程中對血管的損傷提供理論依據(jù),增加SD溶脂的安全性。方法:1、觀察SD對脂肪細胞損傷作用;檢測方法:CCK-8、乳酸脫氫酶檢測。2、觀察SD對HDMECs的損傷作用并研究以Caspase-3激活為主的凋亡途徑在這一損傷中的影響;檢測方法:CCK-8、Western Blot、Real-time PCR、Annexin V/PI雙染。3、研究凋亡在SD損傷脂肪細胞中的影響;檢測方法:Hoechst染色、Western Blot、CCK-8。4、觀察運用Z-DEVD-FMK(Caspase-3抑制劑)后SD對HDMECs損傷程度及凋亡作用方面的變化;檢測方法:CCK-8、Western Blot、Annexin V/PI雙染。結(jié)果:1、不同濃度的SD作用后均可引起人成熟脂肪細胞存活率降低,使脂肪細胞膜受損,細胞數(shù)量減少。2、不同濃度的SD可使HDMECs存活率下降;0.15mg/m L的SD作用于HDMECs 4、8、12h后,Western Blot檢測Bax表達、Caspase-3及PARP活化增加;除4h外,藥物作用8、12h時,Caspase-9活化比對照組顯著增高;Bcl-2無明顯變化;各時間點Caspase-8活化不顯著;加入Z-DEVD-FMK后Caspase-3及PARP活化均減少;Real-time PCR檢測SD作用下HDMECs后Bax mRNA表達稍增加,Bcl-2 mRNA表達無明顯改變;Annexin V/PI雙染流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)低濃度SD作用于HDMECs后細胞早期凋亡稍增加,高濃度時壞死或晚期凋亡的細胞比例相對較大。3、SD作用于脂肪細胞后Hoechst染色未見明顯細胞凋亡;Western Blot檢測Caspase-3無明顯活化;加入Z-DEVD-FMK并未使脂肪細胞存活增加。4、SD聯(lián)合Z-DEVD-FMK可減少SD對HDMECs的損傷,使Caspase-3和PARP活化減少,早期凋亡的比例減少。結(jié)論:SD可以通過依賴Caspase-3的細胞凋亡途徑損傷HDMECs,但其對細胞的物理性破壞作用仍較大。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R656

【參考文獻】

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本文編號：1727861