本文選題：端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶　切入點：基因轉(zhuǎn)染　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:以逆轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN為載體,將h TERT基因轉(zhuǎn)染入體外培養(yǎng)的大鼠雪旺細胞,檢測雪旺細胞端粒酶活性及細胞生物學(xué)特性的影響。進一步探討h TERT基因修飾雪旺細胞移植對脊髓損傷大鼠損傷區(qū)神經(jīng)修復(fù)相關(guān)相關(guān)白表達的檢測及對神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。方法:體外培養(yǎng)大鼠雪旺細胞,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN為載體介導(dǎo)端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(h TERT)基因轉(zhuǎn)染雪旺細胞,體外培養(yǎng)Wistar大鼠雪旺細胞,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN為載體介導(dǎo)端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(h TERT)基因轉(zhuǎn)染,分為3組:對照組、陰性轉(zhuǎn)染組、h TERT轉(zhuǎn)染組。用RT-PCR,Western blot檢測雪旺細胞在轉(zhuǎn)染前后h TERT基因和蛋白的表達。應(yīng)用細胞生長曲線、MTT比色法觀察細胞生長的優(yōu)化作用;采用流式細胞術(shù)測定細胞周期分布的變化。成年雌性Wistar大鼠71只,造模成功66只,隨機分為對照組,SCs組,h TERT-SCs組,22只/組,按照改良的Allen打擊法建立大鼠急性脊髓損傷模型。分別于造模前、造模后1天、3天、1周、2周、3周、4周通過BBB評分、斜板試驗、改良的Tarlov評分進行運動功能評定。造模后72 h通過RT—PCR、Western blot檢測脊髓損傷區(qū)周圍AQP4/9、MMP9/2基因轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達,TUNEL法檢測細胞凋亡情況。造模后4周,HE染色及熒光顯微鏡觀測PKH-26標(biāo)記的SCs存活及分布情況,通過免疫組化法檢測GFAP、Nogo及NF200的表達量,行HRP示蹤觀察神經(jīng)纖維再生情況,通過SEP和MEP觀察大鼠神經(jīng)電生理恢復(fù)情況。結(jié)果:通過逆轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN介導(dǎo)的h TERT基因轉(zhuǎn)染大鼠雪旺細胞后,轉(zhuǎn)染h TERT后,h TERT轉(zhuǎn)染組與對照組、陰性轉(zhuǎn)染組相比h TERT基因和蛋白水平均有表達,細胞的生長速度明顯增快,細胞周期G0/G1期減少,S期細胞數(shù)增多。各組間有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。RT-PCR,Western blot檢測顯示轉(zhuǎn)染h TERT基因的大鼠雪旺細胞體外能表達h TERT;大鼠下肢運動功能評價h TERT-SCs組優(yōu)于SCs組,SCs組優(yōu)于對照組。造模后72小時h TERT-SCs組細胞凋亡指數(shù)均明顯低于對照組(p0.05).造模后72小時,與對照組相比h TERT-SCs組AQP4/9基因和蛋白表達均較顯著降低(p0.05)。造模后4周,HE染色對照組可見脊髓組織缺失及脊髓空洞形成,無神經(jīng)軸索通過。SCs組損傷區(qū)可見少量神經(jīng)軸索樣結(jié)構(gòu),脊髓空洞較小,h TERT-SCs組可見較多神經(jīng)軸索樣結(jié)構(gòu),未見脊髓空洞。PKH-26標(biāo)記的陽性細胞數(shù):h TERT-SCs組最多,SCs組次之,對照組最少,且各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。造模后4周,h TERT-SCs組膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)絲蛋白(NF-200)的表達較對照組明顯升高,差異有顯著性意義(p0.05),h TERT-SCs組Nogo蛋白的表達較對照組明顯降低,差異有顯著性意義(p0.05),HRP陽性神經(jīng)纖維數(shù):h TERT-SCs組最多,SCs組次之,對照組最少,各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。SEP和MEP的潛伏期:h TERT-SCs組SCs組對照組,且各組之間差異有顯著性意義(p0.05);波幅:h TERT-SCs組SCs組對照組,且各組之間差異有顯著性意義(p0.05)。結(jié)論:通過轉(zhuǎn)錄病毒PLXSN為載體介導(dǎo)端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(h TERT)基因轉(zhuǎn)染使雪旺細胞端粒酶活性明顯升高,能夠促進體外培養(yǎng)的大鼠雪旺細胞增殖。h TERT基因修飾雪旺細胞移植可促進脊髓損傷大鼠神經(jīng)突觸的再生,降低脊髓損傷區(qū)周圍AQP/9、MMP9/2基因轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達和神經(jīng)細胞凋亡,促進膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)絲蛋白(NF-200)的表達的升高,降低Nogo蛋白的表達,改善大鼠的肢體運動功能和電生理功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王求永;劉文革;王振宇;;FTY720對大鼠急性脊髓損傷后RhoA表達的影響[J];中國骨科臨床與基礎(chǔ)研究雜志;2010年04期

，

本文編號：1582400