本文關(guān)鍵詞： Progranulin 股骨頭壞死 骨肉瘤 腫瘤壞死因子 ERK1/2 Akt/mTOR　出處：《山東大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：股骨頭壞死(Osteonecrosis of femoral head,ONFH)是骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病,病變早期患者以髖關(guān)節(jié)疼痛及活動障礙為主要臨床表現(xiàn),隨著病情逐漸加重,逐漸累及關(guān)節(jié)間隙使間隙變窄、致髖關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎、甚至股骨頭變形塌陷、關(guān)節(jié)融合,給患者生活帶來巨大影響,后期往往需要行髓心減壓、關(guān)節(jié)融合、關(guān)節(jié)置換等手術(shù)治療。髖關(guān)節(jié)外傷股骨頸骨折、大量攝入酒精、長期大量應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、減壓病等是股骨頭壞死的常見病因,但其確切的病理發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,血管損傷血運(yùn)障礙學(xué)說、脂質(zhì)代謝紊亂學(xué)說等是研究較多的關(guān)于發(fā)病機(jī)制學(xué)說,隨著基因分子生物學(xué)的發(fā)展,對疾病的認(rèn)識逐漸向微觀方向發(fā)展、逐漸深入到分子基因水平。前期研究發(fā)現(xiàn)在壞死的股骨頭骨質(zhì)及關(guān)節(jié)液中多種炎癥因子高表達(dá),同時(shí)發(fā)現(xiàn)在股骨頭壞死患者關(guān)節(jié)液及關(guān)節(jié)軟骨中發(fā)現(xiàn)軟骨降解產(chǎn)物,軟骨退變被證實(shí)在股骨頭壞死病變早期已經(jīng)開始發(fā)生,說明股骨頭壞死病變是一個(gè)整體,涉及到股骨頭骨質(zhì)、關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)液以及相關(guān)的炎癥因子,炎癥反應(yīng)和軟骨退變參與了疾病的發(fā)生發(fā)展,但關(guān)于軟骨退變?nèi)绾伟l(fā)生、炎癥反應(yīng)如何起作用尚不明確。為了進(jìn)一步加深對股骨頭壞死病理機(jī)制的認(rèn)識,應(yīng)重視軟骨退變在疾病進(jìn)展中的作用,并研究軟骨退變及炎癥反應(yīng)在病變過程中作用機(jī)制。骨肉瘤(Osteosarcoma)是骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤,青少年患者多發(fā),每年每百萬人中約有6-8個(gè)新發(fā)病患者。由于腫瘤惡性程度高、易復(fù)發(fā)、易耐藥、易早期發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特點(diǎn),使治療效果不理想很難令人滿意。1970年以前對骨肉瘤的治療以截肢作為最常用的治療方案,但僅有不到10%的5年生存率。目前國際上通用的標(biāo)準(zhǔn)的骨肉瘤治療方案是:術(shù)前新輔助化療盡量殺死骨肉瘤細(xì)胞并消滅微轉(zhuǎn)移灶、手術(shù)盡量完整徹底切除腫瘤、術(shù)后化療,治療效果有了明顯提高,但是自上世紀(jì)70年代以來五年生存率一直維持在60%-70%左右,未有明顯改善,因此為了改善骨肉瘤患者的預(yù)后、提高患者的生活質(zhì)量迫切需要研制新的藥物和方法。研究發(fā)現(xiàn),在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中,生長因子及其激活的信號通路發(fā)揮了較大的作用,因此生長因子及其激活的信號通路可以作為研究骨肉瘤治療的新思路。Progranulin(PGRN)作為一種自分泌生長因子,具有多種生物功能,表達(dá)于多種組織內(nèi)如上皮組織、神經(jīng)組織、軟骨組織及多種腫瘤組織內(nèi),研究證實(shí):PGRN在軟骨細(xì)胞的發(fā)育、分化、增殖中起到重要作用;據(jù)報(bào)道,PGRN在多種腫瘤組織內(nèi)高表達(dá),并對腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移起到重要作用。本研究目的是:檢測股骨頭壞死患者股骨頭軟骨及骨肉瘤中PGRN的表達(dá),并研究PGRN在股骨頭壞死軟骨退變及骨肉瘤中作用及機(jī)制,希望能夠發(fā)現(xiàn)新的診斷及治療靶點(diǎn),以改進(jìn)診斷治療方案,本研究首次對PGRN在股骨頭壞死軟骨及骨肉瘤中的表達(dá)及作用進(jìn)行研究。本研究分為兩部分:第一部分主要研究PGRN在股骨頭壞死軟骨退變中所起到的作用及機(jī)制;第二部分主要研究PGRN在骨肉瘤中的表達(dá)情況,以及PGRN對骨肉瘤細(xì)胞生長增殖、侵襲、遷移所起的作用及作用機(jī)制。第一部分:股骨頭壞死軟骨退變中PGRN表達(dá)及在病變中所起到的作用及機(jī)制研究目的:本研究的目的在于研究PGRN在股骨頭壞死軟骨及血清中的表達(dá)情況,探討其在股骨頭壞死軟骨退變中的作用及其作用機(jī)制。研究方法:分別收集股骨頭和血清標(biāo)本,股骨頭壞死患者作為實(shí)驗(yàn)組、股骨頸骨折患者作為對照組,分別應(yīng)用免疫組化、蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western-blot技術(shù))、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測PGRN在軟骨中的表達(dá)、利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清中PGRN的濃度;體外實(shí)驗(yàn):提取并培養(yǎng)股骨頭壞死軟骨細(xì)胞并加入PGRN刺激,檢測aggrecan和collagen Ⅱ等軟骨合成代謝產(chǎn)物的表達(dá)情況,及信號通路ERK1/2的激活情況。研究結(jié)果:1.經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測、蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western-blot)檢測及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測示:股骨頭壞死組軟骨中PGRN的表達(dá)較股骨頸骨折組明顯增加,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)實(shí)驗(yàn)示:實(shí)驗(yàn)組血清中PGRN濃度高于對照組;2.經(jīng)免疫組化和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測示:腫瘤壞死因子(TNF-α)在股骨肉壞死關(guān)節(jié)軟骨及關(guān)節(jié)液中表達(dá)高于對照組;3.重組PGRN能夠拮抗腫瘤壞死因子(TNF-α)刺激所導(dǎo)致的軟骨分解代謝4.重組PGRN能夠激活信號通路ERK1/2,促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成aggrecan和collagen Ⅱ,對軟骨細(xì)胞合成代謝起促進(jìn)作用,在股骨頭壞死軟骨退變中起到一定的保護(hù)作用。研究結(jié)論:PGRN能夠改善軟骨細(xì)胞的合成代謝、抑制分解代謝,在股骨頭壞死軟骨退變病理進(jìn)程中起到軟骨保護(hù)作用,此次研究加深了股骨頭壞死病變過程中對軟骨退變及PGRN對軟骨退變保護(hù)作用的認(rèn)識。第二部分:骨肉瘤中PGRN的表達(dá),PGRN在骨肉瘤細(xì)胞生長、侵襲、遷移中的作用及作用機(jī)制。研究目的:本研究的目的在于研究PGRN在骨肉瘤細(xì)胞、病人血清及骨肉瘤組織中的表達(dá)情況,并研究其對骨肉瘤細(xì)胞生長、侵襲及遷移的作用及相關(guān)機(jī)制。研究方法:收集骨肉瘤及瘤旁組織標(biāo)本,經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)、蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Westerrn-blot)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)檢測組織中PGRN的表達(dá);收集骨肉瘤患者及正常志愿者血清,經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對比兩組血清中PGRN濃度;經(jīng)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測PGRN在骨肉瘤細(xì)胞中的是否表達(dá),PGRN對骨肉瘤細(xì)胞活性、增殖的影響,是通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測的;對骨肉瘤細(xì)胞運(yùn)動、侵襲及遷移的影響是通過劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)來檢測的;利用重組PGRN刺激骨肉瘤細(xì)胞并檢測MMP-2及相關(guān)信號通路Akt及mTOR的表達(dá)激活情況。研究結(jié)果:1.對兩組組織進(jìn)行免疫組化染色,提取兩組組織總蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot),提取兩組RNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)結(jié)果表明:骨肉瘤組織中PGRN表達(dá)明顯高于瘤旁組織;收集兩組患者血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)結(jié)果表明:血清中PGRN的濃度實(shí)驗(yàn)組高于健康對照組;對骨肉瘤HOS、Sao-2細(xì)胞系進(jìn)行免疫熒光染色,染色證明PGRN在以上兩種骨肉瘤細(xì)胞系表達(dá);2.通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞周期檢測試驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn):PGRN在骨肉瘤細(xì)胞的生長增殖、侵襲及遷移過程中起重要的促進(jìn)作用;3.隨著PGRN濃度的增高其促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)的作用逐漸增強(qiáng),PGRN可以使Akt及mTOR信號通路快速磷酸化激活。研究結(jié)論:研究中我們初次證實(shí)PGRN高表達(dá)于骨肉瘤織及患者血清,證實(shí)骨肉瘤細(xì)胞系中表達(dá)PGRN,發(fā)現(xiàn)PGRN可以激活A(yù)kt及mTOR信號通路,可能通過活化以上信號通路對骨肉瘤細(xì)胞的生長增殖、侵襲遷移起到促進(jìn)作用,本研究增加了對骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等的認(rèn)識,為骨肉瘤的診斷治療的提供了新思路。
[Abstract]:Osteosarcoma of femoral head ( ONFH ) is a common disease of bone joint system . It is a common cause of necrosis of femoral head . In this study , the expression of PGRN in the cartilage of femoral head necrosis and the role and mechanism of PGRN in the treatment of femoral head necrosis cartilage and osteosarcoma were studied . The effects of PGRN on the growth , invasion and migration of osteosarcoma cells were studied by means of immunohistochemistry , Western - blot and polymerase chain reaction ( ELISA ) . The results showed that PGRN could activate the expression of MMP - 2 in osteosarcoma cells . The results showed that PGRN could activate the expression of MMP - 2 in osteosarcoma cells .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R681.8;R738

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李健,郭衛(wèi),楊榮利,曲華毅,樊瑞峰;影響骨肉瘤預(yù)后因素的探討[J];中國骨腫瘤骨病;2004年06期

2 鮑同柱,趙紅衛(wèi),鄭啟新,劉萬軍,劉勇;反義轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因?qū)侨饬黾?xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年04期

3 牛聚偉;吳剛;祝少博;漆白文;錢煒;喻愛喜;;血管擴(kuò)張刺激磷蛋白與骨肉瘤細(xì)胞遷移能力的關(guān)系[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

4 孟令祥,于錫欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;1999年06期

5 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤預(yù)后因素探討[J];實(shí)用腫瘤雜志;2000年05期

6 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)及其抗腫瘤特性的研究[J];中華骨科雜志;2000年01期

7 馬忠泰,栗懷廣,施學(xué)東;骨肉瘤的化療與療效判斷[J];中華骨科雜志;2000年S1期

8 岳文,楊連甲,馬明,董紹忠;體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2000年03期

9 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;體外誘導(dǎo)骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國矯形外科雜志;2000年03期

10 郭喬楠,陳意生;骨肉瘤細(xì)胞增殖活性的測定及其與預(yù)后的關(guān)系[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2000年12期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李紅;龍勉;;力學(xué)微擾對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協(xié)會第七屆全國小兒腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];泛長江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國骨科護(hù)理研討會論文匯編[C];2007年

4 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進(jìn)展[A];第十七屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會暨第三屆海峽兩岸OS會議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

8 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國第八屆骨科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 任勇 李運(yùn)紅 胡顏;莫名關(guān)節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日報(bào);2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬萬里;miR-148a在骨肉瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其功能機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干細(xì)胞特性研究及以DNA-PK為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)骨肉瘤化療耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 成功;內(nèi)臟脂肪素對U2OS細(xì)胞株遷移與侵襲的影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 方永超;環(huán)氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙健;microRNA-21在骨肉瘤細(xì)胞MG63中作用機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 韓康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 朱U，

本文編號：1523176