本文關(guān)鍵詞： α7煙堿型乙酰膽堿受體 RIC-3 炎癥反應(yīng) 非去極化肌肉松弛藥　出處：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：已知機(jī)體存在膽堿能抗炎通路(CAP),即迷走神經(jīng)釋放乙酰膽堿與免疫細(xì)胞膜上的α7乙酰膽堿受體(α7-nAChR)結(jié)合,可抑制炎癥因子的釋放,減輕炎癥反應(yīng)。已有證據(jù)表明,非去極化肌肉松弛藥能與α7-nAChR結(jié)合并抑制其功能。因此我們推測非去極化肌肉松弛藥可與免疫細(xì)胞膜上的α7-nAChR結(jié)合,加重炎癥反應(yīng)。目的從以下方面證實(shí)非去極化肌肉松弛藥可加重炎癥反應(yīng),并探討其機(jī)制：探討不同濃度尼古丁對表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的刺激作用,觀察不同濃度的非去極化肌肉松弛藥對表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的阻斷作用。觀察非去極化肌肉松弛藥逆轉(zhuǎn)尼古丁抑制LPS刺激體外培養(yǎng)人巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的作用。研究非去極化肌肉松弛藥升高內(nèi)毒素血癥大鼠全身、肝臟和脾臟組織TNF-α含量。方法構(gòu)建α7煙堿型乙酰膽堿受體和RIC-3質(zhì)粒,通過RT-PCR、western blot和免疫熒光技術(shù)獲得HEK293細(xì)胞表達(dá)α7煙堿型乙酰膽堿受體的表達(dá)結(jié)果。采用鈣成像技術(shù)觀察不同濃度尼古丁對構(gòu)建表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體的刺激強(qiáng)度。采用α7煙堿型乙酰膽堿受體和RIC-3共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞以獲得在HEK293細(xì)胞上表達(dá)的功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體,采用鈣成像技術(shù)研究非去極化肌肉松弛藥對α7煙堿型乙酰膽堿受體的抑制作用。體外培育人巨噬細(xì)胞,觀察甲基牛扁亭堿(MLA)和不同類型非去極化肌肉松弛藥對尼古丁抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)刺激巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子α (TNF-α)和白介素10(IL-10)的作用。采用ELISA方法來檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-10水平。構(gòu)建內(nèi)毒素血癥的大鼠模型,觀察不同類型非去極化肌肉松弛藥對大鼠血清、肝臟和脾臟中TNF-α水平的影響。采用ELISA法檢測大鼠全身、肝臟和脾臟TNF-α含量。結(jié)果免疫熒光顯示HEK293細(xì)胞上可以表達(dá)α7-nAChR, RT-PCR和western blot分別從mRNA和蛋白水平證實(shí)RIC-3和α7-nAChR共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。鈣成像證明單純α7-nAChR轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞并不能表達(dá)功能性α7-nAChR通過鈣成像表明RIC-3可以促進(jìn)HEK293細(xì)胞上功能性α7-nAChR的表達(dá)。通過鈣成像觀察到非去極化肌肉松弛藥濃度范圍在lnM-100nM,仍可以完全阻斷30μM尼古丁對表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的功能性α7-nAChR激動作用。免疫熒光顯示人巨噬細(xì)胞上天然表達(dá)α7-nAChR。ELISA法檢測證實(shí)采用α7-nAChR拮抗劑甲基牛扁亭堿(MLA)、非去極化肌肉松弛藥均可以逆轉(zhuǎn)1μM尼古丁對LPS刺激人巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌的抑制作用(P0.05),但I(xiàn)L-10水平并未受到影響(P0.05)。在大鼠內(nèi)毒素血癥的動物模型上,采用不同類型非去極化肌肉松弛藥持續(xù)靜脈輸注的大鼠血清、肝臟和脾臟組織中TNF-α含量較生理鹽水對照組明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論RIC-3能促進(jìn)在HEK293細(xì)胞上表達(dá)功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體,功能性α7煙堿型乙酰膽堿受體可表達(dá)在HEK293細(xì)胞上。非去極化肌肉松弛藥能抑制尼古丁對表達(dá)在HEK293細(xì)胞上的功能性α7-nAChR的激動作用。非去極化肌肉松弛藥能逆轉(zhuǎn)尼古丁對LPS刺激人巨噬細(xì)胞的TNF-α分泌的抑制作用。但I(xiàn)L-10水平并未受到影響。靜脈持續(xù)輸注非去極化肌肉松弛藥能加重內(nèi)毒素血癥大鼠炎癥反應(yīng)。綜上所述,非去極化肌肉松弛藥通過阻斷α7煙堿型乙酰膽堿受體加重機(jī)體炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614

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本文編號：1514466