本文關(guān)鍵詞：食道平滑肌的體外構(gòu)建及其體內(nèi)生物相容性研究

  更多相關(guān)文章： 平滑肌細(xì)胞 支架構(gòu)建 生物相容性 原位修復(fù) 食道組織工程

【摘要】：平滑肌，一種具有自律性的無橫紋肌肉組織，在人和動(dòng)物體內(nèi)分布廣泛，普遍存在于消化道、呼吸道、血管、泌尿、生殖等諸多內(nèi)臟器官中，它通過收縮蠕動(dòng)來協(xié)助器官的功能發(fā)揮，是重要的功能組織。食道平滑肌具有內(nèi)環(huán)外縱的結(jié)構(gòu)，是食道中重要的功能部分。食道平滑肌的構(gòu)建和工程化再生對于食道組織工程的研究具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，也為其它器官中的平滑肌組織的重構(gòu)和再生提供技術(shù)參考和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本研究旨在制備良好生物相容性和生物降解性的支架，以引導(dǎo)內(nèi)環(huán)外縱結(jié)構(gòu)的食道肌層組織的再生。首先驗(yàn)證了帶有微槽圖案的支架具有體外誘導(dǎo)細(xì)胞趨向生長的作用。利用自制的硅片模具和醫(yī)用聚氨酯材料制備了模擬平滑肌紋路的支架P1和P2，該結(jié)構(gòu)經(jīng)掃描電鏡（SEM）檢測得到證實(shí)。從健康成年兔子的食道中提取原代的食道平滑肌細(xì)胞，體外擴(kuò)增后，種植在以絲素蛋白接枝改性后的支架上，采用HE染色、免疫組化分析和免疫熒光染色的方法證實(shí)了原代平滑肌細(xì)胞，同時(shí)也證實(shí)了兩種支架對細(xì)胞生長的引導(dǎo)作用。通過細(xì)胞活力測試，確立了最佳的支架改性方法（即最佳的接枝反應(yīng)條件），且發(fā)現(xiàn)連續(xù)微槽的P1較間斷微槽的P2更能滿足細(xì)胞的生長空間，更易促進(jìn)細(xì)胞的方向性生長 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，凹槽支架相對于凸槽支架在誘導(dǎo)細(xì)胞組織方向性生長上更為顯著。因此，我們在實(shí)驗(yàn)中也設(shè)計(jì)了凹型微槽結(jié)構(gòu)的支架。我們用道康寧硅橡膠刻印出與之前模具紋路吻合的聚二甲基硅氧烷（PDMS,Polydimethylsiloxane）模具，從而制備了帶有凹槽的支架P3，通過光鏡圖可以看出這種凹槽支架也具有對細(xì)胞生長的趨向誘導(dǎo)作用，進(jìn)一步免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)這種支架對細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)換也起到了引導(dǎo)作用。并進(jìn)行了動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將絲素蛋白接枝后的凹槽支架，植入成年健康兔的皮下，并與不同表面改性或未改性的支架周圍組織再生情況進(jìn)行比較，通過冷凍切片以及HE染色等方法，確定了凹槽支架的體內(nèi)生物相容性及其引導(dǎo)食道原位平滑肌組織再生的作用更為顯著。在這基礎(chǔ)上，對這些圖案化的、經(jīng)表面改性的支架進(jìn)行了食道平滑肌原位修復(fù)和再生實(shí)驗(yàn)。術(shù)后試驗(yàn)兔能夠存活和進(jìn)食。冷凍切片后HE染色、免疫熒光觀察，，明確了這種支架結(jié)構(gòu)對內(nèi)環(huán)外縱結(jié)構(gòu)的食道肌層組織再生的引導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：平滑肌細(xì)胞 支架構(gòu)建 生物相容性 原位修復(fù) 食道組織工程
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-17
• 1 材料與儀器設(shè)備17-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.1 支架的制備19-21
• 2.1.1 絲素蛋白的提取和純化19
• 2.1.2 支架的制備19-20
• 2.1.3 支架的改性20-21
• 2.2 原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)21-23
• 2.2.1 食道平滑肌細(xì)胞提取及其在支架上的培養(yǎng)21
• 2.2.2 檢測和表征21-23
• 2.3 動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)23-26
• 2.3.1 支架的兔皮下試驗(yàn)探究23-24
• 2.3.2 平滑肌原位修復(fù)24-26
• 3 結(jié)果26-44
• 3.1 支架的構(gòu)建及其細(xì)胞相容性26-34
• 3.1.1 支架的結(jié)構(gòu)26-29
• 3.1.2 SMC 在支架上的生長29-34
• 3.2 支架的細(xì)胞和組織相容性34-37
• 3.3 原位修復(fù)37-44
• 3.3.1 肌層的片狀支架替代37-41
• 3.3.2 肌層的環(huán)形支架替代41-44
• 4 討論44-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 附錄A 主要試劑配制53-54
• 附錄B 中英文詞對照54-55
• 在學(xué)研究成果55-56
• 致謝56-57
• 綜述57-73
• 參考文獻(xiàn)69-73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 裴瑩;鄭學(xué)晶;湯克勇;;膠原及明膠基天然高分子復(fù)合材料研究進(jìn)展[J];高分子通報(bào);2010年02期

2 高平進(jìn),朱鼎良,陳玉英,易靜;蛋白激酶Cα與血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化[J];中華心血管病雜志;1999年06期

3 李輝;;人工食管的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2009年08期

4 徐正云;馬愛群;王亭忠;蔣文慧;胡志;;細(xì)胞間接觸誘導(dǎo)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞的分化(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年15期

本文編號：932738