本文關鍵詞：骨膜去細胞生物支架的制備和鑒定

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【摘要】：目的制備兔骨膜去細胞生物支架,為骨缺損、骨不愈的組織工程研究提供天然的生物支架材料。方法取健康新西蘭大白兔,游離雙側脛骨近端內側骨膜,通過物理凍融(-80℃,24h)、去污劑洗脫(triton-X 100、SDS)和酶消化(DNA酶、RNA酶)獲取骨膜去細胞生物支架。通過HE染色、DAPI染色、瓊脂糖電泳和基因組DNA定量分析(n=5)測定細胞結構及DNA成分殘留;Masson染色和羥脯氨酸測定法(n=6)定性定量檢測骨膜細胞外基質的主要成分(膠原)的保留情況;掃描電子顯微鏡下觀察骨膜去細胞生物支架的表面微結構;CCK8法檢測支架浸提液毒性;皮下包埋實驗(n=4)觀察該支架的免疫排斥反應。結果 HE染色和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色表明去細胞支架無殘留細胞;瓊脂糖電泳未見明顯DNA條帶;DNA定量檢測顯示組織去細胞率達95%以上;Masson染色及羥脯氨酸測定表明去細胞支架膠原成分被保留;掃描電子顯微鏡下細胞外基質呈現(xiàn)三維網(wǎng)狀疏松結構;不同體積分數(shù)的浸提液對骨膜細胞的增殖與對照組(普通培養(yǎng)基)比較無明顯抑制作用(P0.05);異體皮下包埋實驗顯示,該去細胞支架免疫排斥反應不明顯。結論運用物理凍融、去污劑洗脫和酶消化等方法所獲取的骨膜去細胞生物支架細胞去除徹底,細胞外基質的結構及主要成分保留完好,生物相容性良好。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院骨科;
【關鍵詞】： 去細胞 骨膜 膠原 生物相容性 皮下包埋 Masson染色 掃描電子顯微術 兔
【分類號】：R687;R318.08
【正文快照】： 骨缺損、骨不愈是臨床上常見的骨科難治性疾病,其治療棘手、預后不肯定,給患者帶來極大的經濟和心理負擔。骨膜具有較強的成骨能力,在骨折愈合修復方面扮演著重要角色,骨膜也被認為是促進骨移植材料在移植區(qū)域發(fā)揮修復作用的始動因素[1]。國內外也有較多關于骨膜移植臨床上治

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本文編號：912149