本文關鍵詞：基于多種載體的新型固定化蛋白酶的制備和在蛋白質組研究中的應用

  更多相關文章： 原子轉移自由基聚合反應（ATRP） 固定化蛋白酶 磁性納米顆粒 硅膠填料 蛋白質組

【摘要】：近年來，由于發(fā)現(xiàn)和驗證生物標志物、重要功能蛋白質及藥物靶標越來越受到人們的關注，從而使得作為全面分析蛋白質表達變化的有力工具蛋白質組學被廣泛應用到多種疾病的研究中。作為目前蛋白質組研究中應用最為廣泛的研究策略，“鳥槍法”策略是通過對蛋白質的酶解產(chǎn)物肽段進行分析從而獲得相應的蛋白質定性、定量信息。因此，高效、完全的蛋白質酶解便成為該策略中的關鍵環(huán)節(jié)。與傳統(tǒng)溶液酶解方式相比，固定化酶解可顯著降低酶解所需時間，提高樣本處理通量，因此在近年來受到廣泛重視。 本研究采用原子轉移自由基聚合法制備了多種基于聚合物修飾微米、納米載體的新型固定化酶試劑，實現(xiàn)了胰蛋白酶的高密度、高負載量固定。同時，線性聚合物鏈可作為三維支架結構，支撐多層蛋白酶固定，提高了酶與蛋白質底物的碰撞幾率，從而顯著提高了酶解效率和完全性。以標準蛋白質牛血清白蛋白為樣本，使用所制備的固定化酶試劑，1min后即可完成酶解，使用質譜鑒定到肽段的氨基酸序列覆蓋率超過90%，明顯高于溶液酶解或文獻報道現(xiàn)有固定化酶試劑的酶解效率。使用酵母菌或騰沖嗜熱菌全蛋白提取物為樣本，進一步對所使用的微米、納米，以及具有不同表面性的載體材料進行考察發(fā)現(xiàn)，，載體材料的尺度和表面親疏水性對固定化酶的酶解效率以及底物選擇性具有一定影響。所制備固定化酶試劑1-3min的酶解產(chǎn)物鑒定到蛋白質數(shù)量均超過同樣條件下溶液酶解12h的結果。但使用納米材料制備的固定化酶試劑，酶解效率明顯高于微米載體材料。同時，磁性納米顆粒相對具有比表面積大，酶負載量多及磁性納米顆粒通過磁性相對易于從體系中分離等優(yōu)點。而就表面親疏水性而言，疏水聚合物（GMA）修飾磁性顆粒固定化酶與親水聚合物(GMAG)磁性顆粒固定化酶的酶解效率接近，酶解產(chǎn)物中鑒定到的蛋白質數(shù)量相仿，但二者鑒定結果間的相互覆蓋率不高，說明載體表面性質對固定化酶對蛋白質底物的選擇性有一定影響。因此，我們將兩種固定化酶混合使用，有效降低載體選擇性造成的酶解偏性，結果明顯優(yōu)于兩種顆粒單獨酶切，明顯提高蛋白質和肽段的鑒定數(shù)量。
【關鍵詞】：原子轉移自由基聚合反應（ATRP） 固定化蛋白酶 磁性納米顆粒 硅膠填料 蛋白質組
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 英文縮寫詞對照表6-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 新型聚合物雜化微米硅膠固定化酶的制備及酶解效率考察14-27
• 1 材料14
• 2 方法14-17
• 3.結果與討論17-26
• 4 結論26-27
• 第三章 新型聚合物雜化磁性納米顆粒固定化酶的制備、酶解效率考察及與微米顆粒固定化酶的比較27-39
• 1 材料27
• 2 方法27-30
• 3 結果與討論30-38
• 4 結論38-39
• 第四章 不同表面性質載體固定化酶酶解效率、完全性以及酶解產(chǎn)物互補性的比較39-49
• 1 材料39-40
• 2 方法40-42
• 3 結果與討論42-48
• 4 結論48-49
• 參考文獻49-54
• 個人簡歷54
• 碩士期間研究成果54-56
• 致謝56-57
• 綜述57-64
• 參考文獻62-64

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1 邱蔚然;葉林發(fā);;固定化酶和固定化微生物的生物反應器[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1982年12期

2 梁足培,馮亞青,孟舒獻,李剛;殼聚糖及其衍生物在固定化酶中的應用進展[J];中國海洋藥物;2004年04期

3 喻致祥;;固定化酶在臨床檢測中的應用[J];中國生化藥物雜志;1993年02期

4 石陸娥;應國清;唐振興;易喻;熊文悅;;酶膜生物反應器中酶的固定化方法研究及其應用進展[J];藥物生物技術;2006年04期

5 查曉,沈家(馬總),周會,李惟;固定化酶的微環(huán)境效應—載體離子基團性質的影響[J];中國生物化學與分子生物學報;1988年06期

6 徐鳳彩,李明啟;尼龍固定化木瓜蛋白酶及其應用研究[J];中國生物化學與分子生物學報;1992年03期

7 侯建明;吳經(jīng)才;楊秀琴;;用脫乙酰幾丁質制備固定化青霉素�；竅J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1993年03期

8 馬中良;李艷利;焦吉祥;鄒媛媛;鮑真真;王e

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