脂肪干細(xì)胞與絲蛋白—?dú)ぞ厶遣牧仙锵嗳菪缘某醪窖芯?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2017-06-16 03:02
本文關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞與絲蛋白—?dú)ぞ厶遣牧仙锵嗳菪缘某醪窖芯?/strong>，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】：第一部分絲蛋白-殼聚糖支架的制備及其特性測(cè)定 研究目的： 探索一種更接近皮膚的組織工程支架材料,本實(shí)驗(yàn)擬采用溴化鋰-水溶絲體系溶解絲素蛋白,制備絲素蛋白-殼聚糖共混支架。 方法： 采用了溴化鋰-水溶絲體系溶解絲素蛋白,降低絲素蛋白分子的降解,將溶解殼聚糖的醋酸濃度減小到更低水平,以防止混合過程中的絲素蛋白分子的過快變性。本實(shí)驗(yàn)共制備了純SF以及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料。掃描電鏡(SEM)觀察制備的共混支架材料的表觀和斷而形態(tài)；Image J測(cè)量各支架孔徑；測(cè)定各支架吸水率；通過電子拉力機(jī)對(duì)所制備材料的力學(xué)性能進(jìn)行測(cè)試。 結(jié)果： SEM觀察到材料為內(nèi)部多孔的海綿狀結(jié)構(gòu),斷面均勻且沒有宏觀分相的情況出現(xiàn)。隨著SF的濃度增大,所制備的SF/CS共混支架材料的孔徑大小從120±18.2um逐漸減小到52.1±4.8gm。純的SF支架則需要大于5min的時(shí)間；而不同比例的SF/CS共混支架材料在1-3min都達(dá)到了溶脹平衡。機(jī)械強(qiáng)度測(cè)試提示SF/CS多孔共混支架材料均具有較好的斷裂強(qiáng)度和一定的柔韌性能,純SF材料的強(qiáng)度最大,為430±54kPa。 結(jié)論： 采用溴化鋰-水溶絲體系將絲素蛋白和殼聚糖進(jìn)行共混,共混支架材料具備較好的力學(xué)性能,在SEM的斷面圖上沒有出現(xiàn)宏觀的組分間相分離；吸水速率大幅度提升；機(jī)械強(qiáng)度測(cè)試提示SF/CS多孔共混支架材料均具有較好的斷裂強(qiáng)度和一定的柔韌性能。 第二部分脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定 研究目的： 從SD大鼠腹股溝處脂肪提取脂肪干細(xì)胞,了解脂肪干細(xì)胞是否具有多向分化的潛能。 方法： 自SD大鼠(7周齡,體重190+21.4g)的大鼠雙側(cè)腹股溝處切取脂肪組織約5g,經(jīng)常規(guī)酶消化法提取脂肪干細(xì)胞,觀察其細(xì)胞形態(tài),并繪制生長(zhǎng)曲線；采用單克隆抗體標(biāo)記ADSCs,然后采用流式細(xì)胞儀測(cè)定十細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD44、CD90;通過誘導(dǎo)分化劑的誘導(dǎo),將ADSCs誘導(dǎo)分化成脂、成骨,通過油紅“O”染色、茜素紅染色和Von kussa染色了解干細(xì)胞成脂、成骨情況。 結(jié)果： SD大鼠腹股溝脂肪分離培養(yǎng)的細(xì)胞,具有干細(xì)胞的形態(tài)和特性,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物的表達(dá)為CD29,CD44, CD90呈陽性表達(dá),陽性率分別為93%,98%,96%,而CD34表達(dá)呈陰性表達(dá)(0%)：經(jīng)定向誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)ADSCs具有成脂、成骨多向分化的潛能。 結(jié)論： 脂肪十細(xì)胞(ADSCs)分離培養(yǎng)簡(jiǎn)單,獲取容易,具有較好干細(xì)胞特性,傳代穩(wěn)定。 第三部分脂肪干細(xì)胞與絲蛋白-殼聚糖材料體外培養(yǎng)和生物學(xué)活性的研究 研究日的： 采用溴化鋰-水溶絲體系制備的純SF及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料,與ADSCs共培養(yǎng),觀察不同支架上ADSCs的生長(zhǎng)狀態(tài)及增殖情況。 方法： ADSCs與純SF及SF/CS共混材料共培養(yǎng),分別在細(xì)胞培養(yǎng)的第1、3、7、10d時(shí)間CCK-8測(cè)定細(xì)胞增殖情況,第10d時(shí),trizol法提取支架上細(xì)胞的RNA,用RT-PCR法檢測(cè)其Ki67的表達(dá)量。將細(xì)胞濃度為5×104/ml的ADSCs與材料在體外共同培養(yǎng),電鏡下觀察ADSCsl均生長(zhǎng)情況。 結(jié)果： ADSCs在第1、3、7、10dd增值過程中,SF/CS共混材料3：1組最接近對(duì)照組,在第1、3、7、10d其增值速度明顯快于6：1組,9：1組及純SF組,其中純SF組ADSCs增殖速度最慢, P0.05,差別有顯著性。RT-PCR結(jié)果提示SF/CS比例3：組相對(duì)定量值為1.27±0.46,6：1組為0.74±0.23,9：1組為0.67±0.31,純SF組為0.43±0.19。ADSCs在SF/CS共混材料上培養(yǎng)的第3d,掃描電鏡觀察提示,細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形,表面光滑,形態(tài)完整,伸出較多足突與SF/CS共混材料黏附緊密。 結(jié)論： SF/CS共混材料與ADSCs生物相容性好,其中3：1組ADSCs增值速率明顯高十6：1組,9：1組及純SF組。
【關(guān)鍵詞】：脂肪干細(xì)胞 絲蛋白 殼聚糖 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】： - 縮略語5-7
- 中文摘要7-10
- ABSTRACT10-14
- 引言14-17
- 第一部分：絲蛋白-殼聚糖支架的制備及其特性鑒定17-30
- 摘要17-19
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑19-20
- 實(shí)驗(yàn)方法20-23
- 結(jié)果23-27
- 討論27-29
- 小結(jié)29-30
- 第二部分 ：脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定30-46
- 摘要30-32
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑32-34
- 實(shí)驗(yàn)方法34-38
- 結(jié)果38-43
- 討論43-45
- 小結(jié)45-46
- 第三部分 ：脂肪干細(xì)胞與絲蛋白-殼聚糖材料相容性研究46-61
- 摘要46-48
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑48-50
- 實(shí)驗(yàn)方法50-55
- 結(jié)果55-58
- 討論58-60
- 小結(jié)60-61
- 參考文獻(xiàn)61-66
- 全文總結(jié)66-67
- 綜述67-76
- 參考文獻(xiàn)73-76
- 致謝76-78
- 研究生階段發(fā)表的論文78-79
【參考文獻(xiàn)】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 ;In vitro differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells into endothelial-like cells[J];Chinese Science Bulletin;2006年15期
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本文編號(hào)：454181
本文鏈接：http://www.sikaile.net/yixuelunwen/swyx/454181.html
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【摘要】：第一部分絲蛋白-殼聚糖支架的制備及其特性測(cè)定 研究目的： 探索一種更接近皮膚的組織工程支架材料,本實(shí)驗(yàn)擬采用溴化鋰-水溶絲體系溶解絲素蛋白,制備絲素蛋白-殼聚糖共混支架。 方法： 采用了溴化鋰-水溶絲體系溶解絲素蛋白,降低絲素蛋白分子的降解,將溶解殼聚糖的醋酸濃度減小到更低水平,以防止混合過程中的絲素蛋白分子的過快變性。本實(shí)驗(yàn)共制備了純SF以及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料。掃描電鏡(SEM)觀察制備的共混支架材料的表觀和斷而形態(tài)；Image J測(cè)量各支架孔徑；測(cè)定各支架吸水率；通過電子拉力機(jī)對(duì)所制備材料的力學(xué)性能進(jìn)行測(cè)試。 結(jié)果： SEM觀察到材料為內(nèi)部多孔的海綿狀結(jié)構(gòu),斷面均勻且沒有宏觀分相的情況出現(xiàn)。隨著SF的濃度增大,所制備的SF/CS共混支架材料的孔徑大小從120±18.2um逐漸減小到52.1±4.8gm。純的SF支架則需要大于5min的時(shí)間；而不同比例的SF/CS共混支架材料在1-3min都達(dá)到了溶脹平衡。機(jī)械強(qiáng)度測(cè)試提示SF/CS多孔共混支架材料均具有較好的斷裂強(qiáng)度和一定的柔韌性能,純SF材料的強(qiáng)度最大,為430±54kPa。 結(jié)論： 采用溴化鋰-水溶絲體系將絲素蛋白和殼聚糖進(jìn)行共混,共混支架材料具備較好的力學(xué)性能,在SEM的斷面圖上沒有出現(xiàn)宏觀的組分間相分離；吸水速率大幅度提升；機(jī)械強(qiáng)度測(cè)試提示SF/CS多孔共混支架材料均具有較好的斷裂強(qiáng)度和一定的柔韌性能。 第二部分脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定 研究目的： 從SD大鼠腹股溝處脂肪提取脂肪干細(xì)胞,了解脂肪干細(xì)胞是否具有多向分化的潛能。 方法： 自SD大鼠(7周齡,體重190+21.4g)的大鼠雙側(cè)腹股溝處切取脂肪組織約5g,經(jīng)常規(guī)酶消化法提取脂肪干細(xì)胞,觀察其細(xì)胞形態(tài),并繪制生長(zhǎng)曲線；采用單克隆抗體標(biāo)記ADSCs,然后采用流式細(xì)胞儀測(cè)定十細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD44、CD90;通過誘導(dǎo)分化劑的誘導(dǎo),將ADSCs誘導(dǎo)分化成脂、成骨,通過油紅“O”染色、茜素紅染色和Von kussa染色了解干細(xì)胞成脂、成骨情況。 結(jié)果： SD大鼠腹股溝脂肪分離培養(yǎng)的細(xì)胞,具有干細(xì)胞的形態(tài)和特性,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物的表達(dá)為CD29,CD44, CD90呈陽性表達(dá),陽性率分別為93%,98%,96%,而CD34表達(dá)呈陰性表達(dá)(0%)：經(jīng)定向誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)ADSCs具有成脂、成骨多向分化的潛能。 結(jié)論： 脂肪十細(xì)胞(ADSCs)分離培養(yǎng)簡(jiǎn)單,獲取容易,具有較好干細(xì)胞特性,傳代穩(wěn)定。 第三部分脂肪干細(xì)胞與絲蛋白-殼聚糖材料體外培養(yǎng)和生物學(xué)活性的研究 研究日的： 采用溴化鋰-水溶絲體系制備的純SF及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料,與ADSCs共培養(yǎng),觀察不同支架上ADSCs的生長(zhǎng)狀態(tài)及增殖情況。 方法： ADSCs與純SF及SF/CS共混材料共培養(yǎng),分別在細(xì)胞培養(yǎng)的第1、3、7、10d時(shí)間CCK-8測(cè)定細(xì)胞增殖情況,第10d時(shí),trizol法提取支架上細(xì)胞的RNA,用RT-PCR法檢測(cè)其Ki67的表達(dá)量。將細(xì)胞濃度為5×104/ml的ADSCs與材料在體外共同培養(yǎng),電鏡下觀察ADSCsl均生長(zhǎng)情況。 結(jié)果： ADSCs在第1、3、7、10dd增值過程中,SF/CS共混材料3：1組最接近對(duì)照組,在第1、3、7、10d其增值速度明顯快于6：1組,9：1組及純SF組,其中純SF組ADSCs增殖速度最慢, P0.05,差別有顯著性。RT-PCR結(jié)果提示SF/CS比例3：組相對(duì)定量值為1.27±0.46,6：1組為0.74±0.23,9：1組為0.67±0.31,純SF組為0.43±0.19。ADSCs在SF/CS共混材料上培養(yǎng)的第3d,掃描電鏡觀察提示,細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形,表面光滑,形態(tài)完整,伸出較多足突與SF/CS共混材料黏附緊密。 結(jié)論： SF/CS共混材料與ADSCs生物相容性好,其中3：1組ADSCs增值速率明顯高十6：1組,9：1組及純SF組。
【關(guān)鍵詞】：脂肪干細(xì)胞 絲蛋白 殼聚糖 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：
- 縮略語5-7
- 中文摘要7-10
- ABSTRACT10-14
- 引言14-17
- 第一部分：絲蛋白-殼聚糖支架的制備及其特性鑒定17-30
- 摘要17-19
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑19-20
- 實(shí)驗(yàn)方法20-23
- 結(jié)果23-27
- 討論27-29
- 小結(jié)29-30
- 第二部分 ：脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定30-46
- 摘要30-32
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑32-34
- 實(shí)驗(yàn)方法34-38
- 結(jié)果38-43
- 討論43-45
- 小結(jié)45-46
- 第三部分 ：脂肪干細(xì)胞與絲蛋白-殼聚糖材料相容性研究46-61
- 摘要46-48
- 實(shí)驗(yàn)材料與試劑48-50
- 實(shí)驗(yàn)方法50-55
- 結(jié)果55-58
- 討論58-60
- 小結(jié)60-61
- 參考文獻(xiàn)61-66
- 全文總結(jié)66-67
- 綜述67-76
- 參考文獻(xiàn)73-76
- 致謝76-78
- 研究生階段發(fā)表的論文78-79
【參考文獻(xiàn)】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條
1 ;In vitro differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells into endothelial-like cells[J];Chinese Science Bulletin;2006年15期
本文關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞與絲蛋白—?dú)ぞ厶遣牧仙锵嗳菪缘某醪窖芯?/strong>，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào)：454181
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