本文關(guān)鍵詞：不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：皮膚是人體的第一道防御屏障，最易受到各種損傷和疾病的傷害而導(dǎo)致皮膚缺損，組織工程皮膚產(chǎn)品的研發(fā)為皮膚缺損的治療提供了新的手段。角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建表皮結(jié)構(gòu)為外層皮膚提供有利的物理屏障。但是體外角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)易出現(xiàn)分化、增殖能力有限、培養(yǎng)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，因此通過(guò)研究角質(zhì)形成細(xì)胞及其傳代后細(xì)胞在組織工程皮膚的增殖分化情況，可以為我們篩選更優(yōu)代次的種子細(xì)胞提供依據(jù)。 目的： 1、比較三維培養(yǎng)條件下，不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞在真皮層上的分化增殖能力。 2、初步觀察外源性Ⅳ型膠原對(duì)基底膜及表皮形態(tài)的變化情況影響。 3、了解角蛋白、絲聚合蛋白在不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建人工皮膚中的變化情況。 方法： 1、酶消化分離青年男性包皮標(biāo)本獲得角質(zhì)形成細(xì)胞，用Ⅳ型膠原粘附法進(jìn)行分選，并用角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)、傳代，觀察1～5代次角質(zhì)形成細(xì)胞在二維條件下的生長(zhǎng)狀況；用1～5代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建復(fù)方殼多糖組織工程皮膚，分為在表真皮之間加入外源性Ⅳ型膠原組及不加Ⅳ型膠原組，通過(guò)HE、PAS染色及電鏡，觀察各組組織工程皮膚的結(jié)構(gòu)形態(tài)及基底膜形成狀況。 2、取2代角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚，通過(guò)MTT法比較不同密度表皮內(nèi)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖情況;同時(shí)在密度一定條件下，構(gòu)建1、3、5代次角質(zhì)形成細(xì)胞的組織工程皮膚，用MTT法檢測(cè)各代次表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；并利用CK1/CK10、CK5/CK14、Ki67免疫組化染色比較各組組織工程皮膚表皮的增殖分化能力。 3、用Western blot檢測(cè)絲聚合蛋白在各代次表皮的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、1～5代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建的組織工程皮膚都有明顯的表真皮結(jié)構(gòu)。1代、2代較其他代次的分層情況好，且含有黑色素細(xì)胞；2代表皮層厚度明顯高于其他代次（P0.05）。 2、加Ⅳ型膠原組的表真皮間粘附的緊密程度高于未加Ⅳ型膠原組，Ⅳ型膠原對(duì)表皮層的厚度影響不大(P0.05)。Ⅳ型膠原組PAS染色陰性，說(shuō)明單獨(dú)加Ⅳ型膠原在培養(yǎng)時(shí)間非常有限的情況下難以形成基底膜結(jié)構(gòu)。 3、在5×10~4/ml～2×10~5/ml細(xì)胞范圍內(nèi)，組織工程皮膚的表皮中接種的角質(zhì)形成細(xì)胞量越大，越有利于加快細(xì)胞增殖速度，并且前2代角質(zhì)形成細(xì)胞增殖活力較好。 4、2代角質(zhì)形成細(xì)胞ki67增殖系數(shù)接近正常皮膚，，其余各代次角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖系數(shù)逐漸減少（P0.05）。 5、CK1/CK10、CK5/CK14在1、2代皮膚中陽(yáng)性表達(dá)明顯，其余代次對(duì)于兩種角蛋白的表達(dá)并不明顯。 5、絲聚合蛋白在各代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建的表皮中都能表達(dá)，以1、2代角質(zhì)形成細(xì)胞中表達(dá)居多。 結(jié)論： 本研究在三維培養(yǎng)條件下，對(duì)組織工程皮膚的種子細(xì)胞即角質(zhì)形成細(xì)胞及傳代細(xì)胞進(jìn)行比較研究，合適用作種子細(xì)胞的代次是1、2代；Ⅳ型膠原是基底膜重要的組成成分，外源性Ⅳ型膠原能加強(qiáng)表真皮的粘附，但如要形成結(jié)構(gòu)完整的基底膜，需要延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，增加外源性Ⅳ型膠原的接種量等；各代次角質(zhì)形成細(xì)胞均有絲聚合蛋白，說(shuō)明復(fù)方殼多糖組織工程皮膚具有較好保濕、抗菌作用。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 角質(zhì)形成細(xì)胞 增殖 分化 Ⅳ型膠原 三維
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• Abstract5-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚及組織形態(tài)學(xué)比較12-26
• 2.1 材料與方法12-17
• 2.2 結(jié)果17-24
• 2.3 討論24-26
• 第三章 不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建的組織工程皮膚增殖分化的比較26-36
• 3.1 材料與方法26-28
• 3.2 結(jié)果28-33
• 3.3 討論33-36
• 第四章 絲聚合蛋白在組織工程皮膚中的表達(dá)情況36-43
• 4.1 材料與方法36-40
• 4.2 結(jié)果40-41
• 4.3 討論41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 文獻(xiàn)綜述一48-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 文獻(xiàn)綜述二55-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：426603