目的:設(shè)計一種含IKVAV/RGD功能性多肽自組裝水凝膠與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng),觀察細(xì)胞生長狀態(tài)、細(xì)胞相容性、細(xì)胞粘附性能及向神經(jīng)元細(xì)胞分化情況。方法:1.取3-4周齡SD(Sprague Dawley)大鼠采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)BMSCs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)并用流式細(xì)胞術(shù)鑒定BMSCs表面抗原。2.設(shè)計含IKVAV(I-異亮氨酸,K-賴氨酸,V-纈氨酸,A-丙氨酸,V-纈氨酸)/RGD(R-精氨酸,G-甘氨酸,D-天冬氨酸)多肽用固相自動多肽合成儀(Solid-phase peptid synthesis,SPPS)合成,采用HPLC(高效液相色譜)純化并檢測其純度,質(zhì)譜(MS)儀檢測其平均分子量。配制成1wt%含IKVAV/RGD兩親性多肽溶液用等劑量DMEM觸發(fā)自組裝水凝膠形成,并用透射電鏡顯微(TEM)觀察自組裝水凝膠內(nèi)部結(jié)構(gòu)。3.CCK-8試劑盒檢測不同濃度的含IKVAV-RGD自組裝水凝膠與BMSCs共培養(yǎng)細(xì)胞增殖/毒性實驗;死活細(xì)胞染色檢測試劑Calcein-AM/PI分別檢測含IKVAV-RGD自組裝多肽水凝膠與BMSCs共培養(yǎng)(三維體系培養(yǎng))、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料及方法
    2.1 主要材料和試劑
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 細(xì)胞
        2.1.3 多肽合成
        2.1.4 主要試劑及產(chǎn)地
        2.1.5 主要實驗設(shè)備及產(chǎn)地
        2.1.6 主要溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 原代BMSCs的分離及培養(yǎng)
        2.2.2 原代BMSCs的傳代
        2.2.3 BMSCs的鑒定
        2.2.4 兩親性多肽設(shè)計、合成及表征
        2.2.5 兩親性多肽自組裝水凝膠與BMSCs共培養(yǎng)
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果及分析
    3.1 BMSCs培養(yǎng)及傳代
    3.2 流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)記抗原CD34、CD45 CD90、CD105 的表達(dá)
    3.3 兩親性多肽設(shè)計及合成的檢測
    3.4 含IKVAV/RGD兩親性多肽觸發(fā)自組裝水凝膠
    3.5 BMSCs在含IKVAV/RGD兩親性多肽自組裝水凝膠表面生長情況
    3.6 透射電鏡下表征含IKVAV/RGD兩親性多肽自組裝水凝膠
    3.7 含IKVAV-RGD自組裝水凝膠對BMSCs細(xì)胞增殖與毒性實驗
    3.8 含IKVAV-RGD多肽自組裝水凝膠對BMSCs死活細(xì)胞染色實驗
    3.9 IKVAV-RGD多肽自組裝水凝膠對BMSCs粘附性能實驗
    3.10 實時熒光定量PCR檢測mRNA表達(dá)水平
    3.11 細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3844605