膜納米管是近年發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在于各類型動物細胞間的長程連接結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn),膜納米管可以作為細胞間通訊、信號傳導(dǎo)和病原體擴散的通道或“橋梁”,在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域引起了人們的極大關(guān)注。系統(tǒng)地研究膜納米管的運輸機制對詮釋依賴于膜納米管的細胞間通訊具有非常重大的意義。禽流感病毒能夠造成流感疫情的周期性流行或偶爾的全球性大爆發(fā),對公共健康是一個潛在、巨大的威脅。研究禽流感病毒的侵染機制并結(jié)合膜納米管研究病毒的胞間傳播機制,不僅有助于解釋禽流感病毒的跨種屬侵染行為,而且對預(yù)防和控制病毒性疾病的傳播和流行有很大的幫助。這些機制的研究都迫切需要一種強有力的技術(shù)來對活細胞中的生物事件進行原位、實時地長時間監(jiān)測。單顆粒示蹤技術(shù)能夠?qū)崟r、動態(tài)、原位地示蹤單個顆�；騿蝹�分子的運動軌跡,被廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。由于量子點具有熒光強度高、光穩(wěn)定性好等特性,因此作為熒光標(biāo)記物非常適合于長時間的單顆粒示蹤。在本工作中,我們以膜納米管和禽流感病毒為研究對象,利用基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)研究了膜納米管運輸機制及禽流感病毒侵染行為等熱點生物學(xué)問題。本論文的主要研究內(nèi)容如下： (1)利用基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)研究...

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 第1章 緒論
1.1 引言
1.2 單顆粒示蹤技術(shù)
    1.2.1 成像方法
    1.2.2 數(shù)據(jù)處理
    1.2.3 單顆粒示蹤技術(shù)的應(yīng)用
1.3 量子點的熒光性質(zhì)及其應(yīng)用
    1.3.1 量子點的熒光性質(zhì)
    1.3.2 量子點在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
1.4 基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)及其應(yīng)用
    1.4.1 量子點在單顆粒示蹤領(lǐng)域的優(yōu)越性
    1.4.2 基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)在生物領(lǐng)域的應(yīng)用
1.5 本文的選題背景和研究內(nèi)容
參考文獻 第2章 基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)研究癌細胞間膜納米管的運輸機制
2.1 引言
2.2 實驗方法
    2.2.1 試劑和儀器
    2.2.2 緩沖溶液的配制
    2.2.3 細胞培養(yǎng)及量子點標(biāo)記麥胚凝集素
    2.2.4 熒光標(biāo)記細胞的微絲、微管結(jié)構(gòu)及肌球蛋白
    2.2.5 對細胞微絲、微管結(jié)構(gòu)及ATP的藥物抑制
    2.2.6 顯微注射肌球蛋白抗體
    2.2.7 共聚焦顯微成像
    2.2.8 圖像處理及數(shù)據(jù)分析
2.3 結(jié)果與討論
    2.3.1 A549細胞膜納米管的形成及骨架組成
    2.3.2 量子點標(biāo)記的麥胚凝集素在膜納米管內(nèi)的運動行為
    2.3.3 量子點標(biāo)記的麥胚凝集素在膜納米管內(nèi)的相互作用
    2.3.4 量子點標(biāo)記的麥胚凝集素在膜納米管內(nèi)的運動依賴于微絲
    2.3.5 量子點標(biāo)記的麥胚凝集素在膜納米管內(nèi)的運動受肌球蛋白驅(qū)動
2.4 結(jié)論
參考文獻 第3章 基于量子點的單顆粒示蹤技術(shù)研究與膜納米管相關(guān)的禽流感病毒侵染機制
3.1 引言
3.2 實驗部分
    3.2.1 試劑與儀器
    3.2.2 緩沖溶液的配制及細胞培養(yǎng)
    3.2.3 禽流感H9N2病毒的擴增
    3.2.4 禽流感H9N2病毒滴度的測定
    3.2.5 量子點標(biāo)記禽流感H9N2病毒的包膜
    3.2.6 熒光標(biāo)記細胞的微絲、微管結(jié)構(gòu)及病毒HA蛋白
    3.2.7 共聚焦顯微成像觀察、圖像處理及數(shù)據(jù)分析
3.3 結(jié)果與討論
    3.3.1 Vero細胞間膜納米管的形態(tài)和骨架結(jié)構(gòu)
    3.3.2 禽流感H9N2病毒對Vero細胞膜納米管的誘導(dǎo)效應(yīng)
    3.3.3 細胞膜納米管相關(guān)的病毒侵染過程
    3.3.4 病毒在細胞膜納米管內(nèi)的運動行為分析
3.4 結(jié)論
參考文獻 第4章 基于單顆粒示蹤技術(shù)研究禽流感病毒在人細胞內(nèi)的侵染機制及其依賴膜納米管的胞間運動行為
4.1 引言
4.2 實驗部分
    4.2.1 試劑和儀器
    4.2.2 緩沖溶液的配制
    4.2.3 MDCK細胞和HBE細胞的培養(yǎng)
    4.2.4 H9N2禽流感病毒的擴增、病毒滴度的測定
    4.2.5 量子點標(biāo)記禽流感H9N2病毒的包膜
    4.2.6 熒光標(biāo)記細胞的微絲、微管、晚期內(nèi)體及細胞核
    4.2.7 對細胞微絲、微管結(jié)構(gòu)的藥物抑制
    4.2.8 細胞上唾液酸受體的標(biāo)記
    4.2.9 流式細胞術(shù)檢測唾液酸受體表達量
    4.2.10 共聚焦顯微成像觀察
    4.2.11 圖像處理及數(shù)據(jù)分析
4.3 結(jié)果與討論
    4.3.1 禽流感H9N2病毒在HBE細胞中群體化侵染行為
    4.3.2 單個禽流感H9N2病毒在細胞內(nèi)侵染行為
    4.3.3 唾液酸受體在兩種細胞上的表達量對比
    4.3.4 唾液酸受體SAα2,3Gal和SAα2,6Gal在細胞中的運動行為
    4.3.5 禽流感H9N2病毒在HBE細胞間膜納米管中的運動行為
4.6 結(jié)論
參考文獻 第5章 總結(jié)與展望
參考文獻 附錄：攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表及待發(fā)表的研究成果 致謝



本文編號：3745472