本文關(guān)鍵詞：基于3D打印技術(shù)的新型電紡聚偏二氟乙烯材質(zhì)補片體外細胞毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 1.評價基于3D打印技術(shù)的電紡工藝制成的聚偏二氟乙烯（polyvinylidenefluoride，PVDF）材質(zhì)盆底補片對小鼠成纖維細胞(L929細胞）的細胞毒性，并與聚丙烯（polypropylene，PP）網(wǎng)片的細胞毒性進行比較。 2.建立從人陰道壁組織分離人陰道上皮細胞(hunman vaginal epithelial cells，hVECs)及其體外培養(yǎng)方法，并對其體外生物學(xué)特性進行研究。用hVECs對電紡絲工藝制成的PVDF材質(zhì)盆底補片的細胞毒性進行研究。 材料與方法 1.依據(jù)ISO10993的評價標(biāo)準(zhǔn)采用L929細胞進行電紡PVDF材質(zhì)補片的細胞毒性研究。實驗分為A組（空白對照組，完全培養(yǎng)基），B組（乳膠手套浸提液,陽性對照組），C組（聚丙烯材料浸提液,陰性對照組），D組（PVDF材料浸提液組）4組。(1)評價細胞形態(tài)學(xué)及代謝特性：用四組材料浸提液分別培養(yǎng)L929細胞24h、48h、72h，倒置相差顯微鏡觀察L929細胞形態(tài)；四唑化合物MTS比色法測定各組吸光度值，并計算相對增值率（relative growth rate，RGR）進行毒性分級。(2)評價細胞凋亡：用A組、B組、C組、D組培養(yǎng)基培養(yǎng)L929細胞72h后，通過檢測細胞凋亡獲得各組正常細胞及晚期凋亡、壞死細胞比率。(3)評價細胞相容性：將L929細胞種植于PVDF膜片上，掃描電鏡觀察培養(yǎng)1天、3天、7天時L929細胞生長情況。 2.取因盆腔器官脫垂行陰道前后壁修補患者的陰道前壁組織，II型中性蛋白酶4℃過夜消化陰道組織后分離上皮層和固有層，上皮層用胰酶進一步消化成細胞懸液接種到角化細胞無血清培養(yǎng)基（K-SFM）。顯微鏡下觀察hVECs形態(tài)及增值特征；取第1代hVECs測定細胞生長曲線；通過角蛋白免疫染色對hVECs進行鑒定。依據(jù)ISO10993的評價標(biāo)準(zhǔn)進行電紡PVDF補片對VECs細胞毒性的實驗。顯微鏡觀察hVECs與四組材料浸提液共培養(yǎng)24h、48h、72h各時相點的形態(tài)學(xué)變化；MTS比色法檢測四組吸光度值，據(jù)此計算RGR并進行毒性分級。流式細胞儀測定A、B、C、D組細胞中正常存活細胞及晚期凋亡加壞死細胞所占百分比。將hVECs種植于PVDF膜片上，掃描電鏡觀察在第1天、第3天及第7天時細胞在材料上的生長情況。 結(jié)果 1.在24h、48h、72h三個時相點A組、C組、D組L929細胞形狀、貼壁狀態(tài)、及增殖情況基本一致，見細胞形態(tài)正常，呈梭形或不規(guī)則三角形，貼壁生長良好；B組見大量死細胞和細胞碎裂，細胞層幾乎完全破壞，B組對L929細胞呈現(xiàn)重度毒性。通過MTS測定四組細胞在三個時間的吸光度：與A組細胞比較，C組、D組細胞毒性分級為0級和0~1級，B組細胞細胞毒性分級為4級；A、C、D組3組吸光度值兩兩進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），A、C、D組3組分別與B組吸光度值比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。72h時各組細胞凋亡結(jié)果：A組、B組、C組及D組細胞存活細胞的比率分別（92.43±1.24）%、（3.66±0.25）%、（92.23±0.64）%和（92.8±0.89）%，晚期凋亡加壞死細胞比率為（4.32±1.14）%、（95.06±1.33）%、（3.57±1.15）%、（3.85±1.08）%，A、C、D組兩兩進行比較，，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），A、C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。掃描電鏡提示隨著L929細胞在PVDF材料種植時間的延長，細胞逐漸增多并向材料的纖維空隙向深層張入。 2.原代陰道上皮細胞接種24h左右細胞開始貼壁，4天后細胞生長加快，一般原代細胞7~10天可完成傳代。傳代后hVECs24h可基本完成貼壁，5~7天可進行傳代。hVECs呈多角形，形態(tài)大小均一，折光性較好。hVECs5代后逐漸老化。使用角蛋白免疫組織化學(xué)染色陽性。 3.在24h、48h、72h三個時相點A組、C組、D組陰道上皮細胞細胞形狀、貼壁狀態(tài)、及生長情況基本一致，見細胞大小均一，細胞呈多角形，貼壁生長良好；B組見大量死細胞和細胞碎裂，基本未見到貼壁細胞，細胞層完全破壞。通過MTS測定四組細胞在三個時間的吸光度：與A組細胞比較，C組、D組細胞毒性分級為1級及0~1級，B組細胞細胞毒性分級為4級；A、C、D組3組吸光度值組間比較無顯著性差異，3組分別與B組吸光度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。流式細胞儀測定72h4組細胞凋亡情況提示：各組細胞存活細胞的比率分別為（78.73±3.00）%、（6.8±2.14）%、（76.57±5.86）%、（78.43±2.35）%，A、C、D組兩兩進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），A、C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）；晚期凋亡加壞死細胞分別為（3.36±1.38）%、（80.43±0.61）%、（7.8±0.61）%、（4.12±0.44）%，A、C、D組與B組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，C組高于A組、D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。掃描電鏡提示隨著細胞在PVDF材料種植時間的延長，細胞逐漸增多并向材料的纖維空隙向深層張入。 結(jié)論 1.中性蛋白酶II型可以完整的分離出陰道上皮層，兩步酶消化法獲得純度較高的陰道上皮細胞。 2.PVDF材料對于L929細胞及hVECs無細胞毒性。 3.hVECs較L929細胞對盆底材料的毒性更加敏感性。
【關(guān)鍵詞】：靜電紡絲 聚偏二氟乙烯材料 L929細胞 人陰道上皮細胞 生物相容性 體外細胞毒性
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;R711.5
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-10
• 目錄10-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 1 人工合成補片在女性盆底功能障礙性疾病中的應(yīng)用12-14
• 2 電紡PVDF材質(zhì)補片的特點14-15
• 3 體外細胞毒性實驗中的細胞15-16
• 第一章 PVDF 補片對 L929 細胞體外細胞毒性研究16-26
• 1 材料與方法16-20
• 2 結(jié)果20-23
• 3 討論23-26
• 第二章 VECs 與聚偏二氟乙烯材質(zhì)補片的體外細胞毒性研究26-37
• 1 材料與方法26-30
• 2 結(jié)果30-34
• 3 討論34-37
• 全文結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 附圖42-43
• 在學(xué)期間發(fā)表論文43-44
• 致謝44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李亞蘭;張曉紅;王建六;魏麗惠;;補片在盆腔器官脫垂全盆底重建術(shù)中應(yīng)用的初步臨床分析[J];中國婦產(chǎn)科臨床雜志;2008年02期

2 羅新;王曉玉;沈媛;蔣學(xué)風(fēng);李瑞滿;帥翰林;馬雪楓;謝靜燕;李玉娟;;Prolift網(wǎng)片聯(lián)合尿道中段懸吊治療POP或合并SUI患者的近期療效[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2009年04期

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  本文關(guān)鍵詞：基于3D打印技術(shù)的新型電紡聚偏二氟乙烯材質(zhì)補片體外細胞毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：371440