目的建立旋轉(zhuǎn)細胞培養(yǎng)系統(tǒng)（Rotary Cell Culture System,RCCS）,探究動態(tài)力學刺激下血小板裂解液（Platelet lysate,PL）復合國產(chǎn)多孔鉭對成骨細胞相關蛋白表達以及成骨細胞分化的影響。方法1大體和顯微鏡下觀察多孔鉭形態(tài)特征。2采用反復凍融法制備血小板裂解液,用PL修飾國產(chǎn)多孔鉭,并觀察細胞-多孔鉭復合物生長狀態(tài)。3 CCK-8法篩選PL最佳體積分數(shù)。4實驗分組:MG63細胞組（A組）,MG63細胞+多孔鉭組（B組）,MG63細胞+多孔鉭+動態(tài)培養(yǎng)組（C組）,MG63細胞+血小板裂解液+多孔鉭組（D組）,MG63細胞+血小板裂解液+多孔鉭+動態(tài)培養(yǎng)組（E組）。5用ELISA法檢測各組細胞成骨因子表達情況。6用Western blot法檢測成骨因子表達情況。7檢測各組細胞中堿性磷酸酶活性和鈣離子含量。8檢測動態(tài)組和靜態(tài)組乳酸和葡萄糖含量。結果1多孔鉭金屬材料為圓片狀金屬,直徑約為1.5cm,厚度約為0.2cm,外觀為灰色,呈現(xiàn)金屬光澤,表面呈凹凸不平狀,可見很多細小顆粒,掃描電鏡下觀察可見細小顆粒構成的蜂窩狀微孔結構,各個孔隙之間相互聯(lián)通,孔徑大小均勻... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
引言
第1章 實驗研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 主要實驗試劑
        1.1.3 主要實驗儀器
        1.1.4 主要試劑的配置
        1.1.5 多孔鉭的大體和微觀觀察
        1.1.6 MG63細胞的培養(yǎng)和鑒定
        1.1.7 MG63細胞和多孔鉭支架復合培養(yǎng)
        1.1.8 鬼筆環(huán)肽染色MG63細胞和多孔鉭材料復合物
        1.1.9 血小板裂解液的制備
        1.1.10 CCK-8法篩選血小板裂解液最佳體積分數(shù)
        1.1.11 血小板裂解液與MG63細胞復合培養(yǎng)
        1.1.12 實驗分組
        1.1.13 ELISA 法檢測成骨細胞COL-1、RUNX2、OPN表達情況
        1.1.14 Western blot法檢測成骨細胞COL-1、RUNX2、OPN表達情況
        1.1.15 堿性磷酸酶試劑盒檢測ALP活性情況
        1.1.16 鈣離子檢測試劑盒檢測鈣離子含量情況
        1.1.17 動態(tài)和靜態(tài)培養(yǎng)中乳酸/葡萄糖含量情況
        1.1.18 統(tǒng)計學分析
    1.2 結果
        1.2.1 國產(chǎn)多孔鉭材料大體和微觀結構以及細胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)裝置
        1.2.2 MG63細胞形態(tài)學觀察
        1.2.3 熒光顯微鏡觀察鬼筆環(huán)肽染色MG63細胞和多孔鉭材料復合
        1.2.4 血小板裂解液最佳體積分數(shù)篩選
        1.2.5 ELISA法檢測成骨因子的表達結果
        1.2.6 Western blot法檢測成骨因子表達結果
        1.2.7 堿性磷酸酶活性檢測結果
        1.2.8 鈣離子檢測結果
        1.2.9 各組細胞乳酸、葡萄糖檢測結果
    1.3 討論
        1.3.1 MG63細胞與多孔鉭共生長情況良好
        1.3.2 PL對成骨過程具有增強作用
        1.3.3 動態(tài)培養(yǎng)和PL對MG63細胞復合多孔鉭能增強成骨基因表達
        1.3.4 動態(tài)培養(yǎng)能夠改善細胞培養(yǎng)環(huán)境
    1.4 小結
參考文獻
結論
第2章 綜述 基因治療骨關節(jié)炎的研究進展
    2.1 關節(jié)炎的病理機制
    2.2 基因治療的概念
    2.3 基因治療的策略
        2.3.1 軟骨損傷相關目的基因的選擇
        2.3.2 基因治療的靶細胞
        2.3.3 導入基因的表達載體
        2.3.4 基因的遞送方式
    2.4 基因的組合治療和RNA技術
    2.5 總結與展望
    參考文獻
致謝
在學期間研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]靜/動態(tài)培養(yǎng)模式對CIK細胞體外擴增與代謝特性的影響及其機制[D]. 張偉偉.華東理工大學 2019
[2]含鉭殼聚糖支架在骨質(zhì)疏松性骨缺損修復中的應用研究[D]. 王安.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學 2018
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[4]周期性動態(tài)壓力對成骨細胞CLC-3離子通道影響的機制研究[D]. 王大維.河北醫(yī)科大學 2017
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本文編號：3657663