不可控出血是造成戰(zhàn)傷死亡、意外死亡和外科手術死亡的重要原因,理想的止血材料對減少出血致死十分重要。自組裝多肽RADA-16（RADARADARADARADA）是化學合成的一種小肽。1%的RADA-16溶液（w/v）接觸出血創(chuàng)面后,迅速自組裝成網狀納米纖維屏障,可在15s內終止成年倉鼠腦、脊髓、股動脈、肝等部位的創(chuàng)傷出血。已被美國麻省理工學院下屬公司開發(fā)為止血產品。由于來源依賴合成,純化困難,價格昂貴,目前僅用于腦外科手術,應用范圍和受惠人群極大受限。解決該問題的關鍵在于降低RADA-16的生產成本�；蚬こ叹l(fā)酵是目前低成本獲取藥用蛋白的首選方法。但是,RADA-16相對而言分子量偏低,穩(wěn)定性太差而難以獲得理想的表達水平。因此提高RADA-16在宿主細胞中的穩(wěn)定性是實現基因工程法生產RADA-16的關鍵,而將RADA-16與其他蛋白融合表達有利于提高其表達產物穩(wěn)定性。類彈性蛋白是基于天然牛彈性蛋白序列中高頻出現的短小重復序列VPGXG（X是Pro以外的任何一種氨基酸）,利用過基因重組技術得到的一種多肽,具有天然彈性蛋白的部分活性,已被應用于細胞培養(yǎng)、組織修復、藥物緩釋和標簽純化蛋白。本... 

【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ITC純化示意圖

圖 3 pMD19-T-hELP36R 的 BamHI & XhoI 雙酶切檢測結果圖 3 附注：M：DL5000；1：pMD19-T-hELP36 酶切產物；2-5：1，2，3，4 號 pMD19-T-hELP36R酶切產物；6-9：1，2，3，4 號 pMD19-T-hELP36R 質粒 DNA。從圖 3 可以看出，經 BamHI & XhoI 雙酶切處理，pMD19-T-hELP36 被水解成單的一條帶，來自 4 個轉化克隆的重組質粒被 BamHI & XhoI 雙酶切后，均被水解成片段，其中一個片段與 pMD19-T-hELP36 水解產物大小一致，另外一個片段很小，近 100bp，而該片段在相同上樣量的 pMD19-T-hELP36 質粒 DNA 樣品中并未出現見圖 3），初步說明 RADA16 編碼基因插入到 pMD19-T-hELP36 的 BamHI 與 XhoI點之間，該結果經隨后的序列分析得到了進一步確證（見圖 4）。

mHI & XhoI 雙酶切處理，pMD隆的重組質粒被 BamHI & XhMD19-T-hELP36 水解產物大小一上樣量的 pMD19-T-hELP36 質16 編碼基因插入到 pMD19-T-h列分析得到了進一步確證（見pMD19-T-hELP36-RADA16 序列測定 的構建

【參考文獻】：
期刊論文
[1]新型止血材料纖維蛋白貼的止血作用研究[J]. 黃遠鏗,肖百全,歐慧瑜,韓重,楊威.  中國藥理學通報. 2013(08)
[2]纖溶酶系統在成肌纖維細胞凋亡、組織纖維化過程中的作用[J]. 宋輝,王明席,許瑞安.  中國藥理學通報. 2012(06)
[3]新型止血材料SURGICELTM和明膠海綿在神經外科手術中的應用（英文）[J]. 霍雷,阮文華,丁志良,成之奇,吳剛.  中國組織工程研究. 2012(03)
[4]生物醫(yī)用可吸收止血材料的研究與臨床應用[J]. 汪向飛,張曉丹,周漢新.  中國組織工程研究與臨床康復. 2010(21)
[5]戰(zhàn)創(chuàng)傷止血敷料的現狀及展望[J]. 張平,肖南,張治綱,李曙光.  創(chuàng)傷外科雜志. 2009(04)
[6]眼鏡蛇毒金屬蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及機制[J]. 王彩娥,孫黔云,李敏,石京山.  中國藥理學通報. 2009(06)
[7]戰(zhàn)創(chuàng)傷快速止血材料及其臨床應用[J]. 田浩,吳良平,張玉新.  臨床軍醫(yī)雜志. 2008(06)
[8]傷口止血材料研究進展[J]. 張德興,何忠杰.  中國急救醫(yī)學. 2005(05)
[9]藻酸鈣敷料用于鼻內填塞的效果觀察[J]. 方美珍,蘭龍江.  護理研究. 2004(06)
[10]Sorbalgon藻酸鈣敷料用于鼻內填塞效果觀察[J]. 方美珍,蘭龍江.  臨床醫(yī)學. 2004(01)



本文編號：3602835