核糖核酸酶A（RNase A）是一種廣泛應(yīng)用于酶學(xué)、生物化學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)等領(lǐng)域研究的工具酶,同時(shí),這種具有有效殺傷腫瘤細(xì)胞和抑制HIV-1病毒復(fù)制能力的核酸酶可直接作為多種疾病的治療藥物;核糖核酸酶H（RNase H）是一種特異性切割RNA/DNA雙鏈中的核糖核苷酸的核酸內(nèi)切酶,在調(diào)節(jié)免疫防御過(guò)程及維持真核生物基因組穩(wěn)定方面具有重要意義。因此,開(kāi)展兩種相關(guān)性核酸酶的活性監(jiān)測(cè)不僅能對(duì)酶動(dòng)力學(xué)進(jìn)行分析而且能對(duì)酶與疾病之間的關(guān)系進(jìn)行揭示。本論文基于還原型氧化石墨烯（rGO）尺寸小、分散性好、猝滅能力強(qiáng)這些優(yōu)點(diǎn),開(kāi)展了簡(jiǎn)單、特異、靈敏的核糖核酸酶檢測(cè)體系構(gòu)建及其應(yīng)用研究。主要內(nèi)容如下:1.基于rGO熒光納米探針的RNase A酶活性分析方法建立和應(yīng)用。首先,我們基于rGO和熒光探針構(gòu)建了一個(gè)RNase A活性檢測(cè)平臺(tái)。結(jié)果表明:該體系的最適還原型氧化石墨烯濃度為8μg/mL,最適反應(yīng)溫度與時(shí)間分別為37℃和35 min。體系中RNase A活性的檢測(cè)下限為0.05 pg/μL。為了驗(yàn)證該方法在實(shí)際中的應(yīng)用性,我們利用該方法考察了不同價(jià)態(tài)的重金屬離子對(duì)RNase A活性影響。結(jié)果表明:重金屬離子... 

【文章來(lái)源】：湖南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

直接電化學(xué)法監(jiān)測(cè)核糖核酸酶活性的原理圖

圖 1.1 直接電化學(xué)法監(jiān)測(cè)核糖核酸酶活性的原理圖[35]ato 等人利用金電極和循環(huán)伏安法構(gòu)成的電極傳感器來(lái)檢測(cè)該金電極上附著一段核酸序列，包括固定部分、核糖核酸酶點(diǎn)以及與之相鄰的作為電化學(xué)活性位點(diǎn)的二茂鐵脫氧核糖溶液中該傳感器電極的電流響應(yīng)隨酶濃度的增加而降低。這測(cè)范圍為 1.0×10-11~1.0×10-6g/mL，比已有的電化學(xué)生物傳是，它仍有不直觀、信號(hào)小等缺點(diǎn)。

圖 1.3 基于陽(yáng)離子聚噻吩衍生物的比色法檢測(cè)核糖核酸酶 H 活性的原理圖[37究表明，帶負(fù)電荷的單鏈 DNA 能有效地穩(wěn)固納米粒子對(duì)抗鹽溶特點(diǎn)，2011 年 Xiaoji Xie 等人發(fā)展了一種利用納米金的比色法檢性[38]。其原理為：當(dāng)緩沖液中的 DNA-RNA 雙鏈底物與 HIV-1 R產(chǎn)生單鏈 DNA 和單鏈 RNA 片段。之后再將金納米顆粒加入，切所獲得的單鏈 DNA 和 RNA 片段能夠附著在金納米顆粒的表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氧化石墨烯保護(hù)的核酸分子探針及其在生物分析中的應(yīng)用[J]. 崔亮,張薇婷,林暉,朱志,楊朝勇.  廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(05)
[2]Reduced Graphene Oxide Mediated SnO2 Nanocrystals for Enhanced Gas-sensing Properties[J]. Yanhong Chang,Yunfeng Yao,Bin Wang,Hui Luo,Tianyi Li,Linjie Zhi.  Journal of Materials Science & Technology. 2013(02)
[3]熒光探針技術(shù)在兩親分子有序組合體研究中的應(yīng)用[J]. 高莉?qū)?夏慧蕓,陳華鑫,鄧娟利.  化學(xué)通報(bào). 2012(08)
[4]中華眼鏡蛇毒核糖核酸酶的分離純化及其特殊生物學(xué)活性[J]. 陶鳳云,趙偉,林強(qiáng),馬潤(rùn)宇.  中國(guó)生化藥物雜志. 2010(03)
[5]中國(guó)林蛙卵核糖核酸酶的分離純化及其抗腫瘤作用[J]. 陶鳳云,趙偉,林強(qiáng),馬潤(rùn)宇.  中國(guó)生物工程雜志. 2010(05)
[6]人類(lèi)核糖核酸酶P的研究進(jìn)展[J]. 寧容,張文軍,李紅枝.  國(guó)際藥學(xué)研究雜志. 2008(04)
[7]蕈菌核糖核酸酶蛋白和肽的研究進(jìn)展[J]. 孔祥輝,張介馳,馬慶芳,韓增華,張丕奇,楊志興.  菌物研究. 2008(02)
[8]核糖核酸酶研究進(jìn)展[J]. 錢(qián)敏,李關(guān)榮,魯成.  蠶業(yè)科學(xué). 2004(02)
[9]核糖核酸酶及其在胰腺癌診斷中的應(yīng)用[J]. 景在平,仲劍平.  國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè). 1989(03)

碩士論文
[1]重組核糖核酸酶A的表達(dá)和復(fù)性研究[D]. 肖文楚.天津大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3599618