目的:研究新型磷酸鈣復(fù)合骨水泥（磷酸鈣骨水泥/骨基質(zhì)明膠、磷酸鈣骨水泥/骨基質(zhì)明膠+聚乳酸-羥基乙酸共聚物空白微球）對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone mesenchymal stem cell,BMSCs）的體外骨誘導(dǎo)活性及細(xì)胞毒性。以期獲得一種適合骨缺損修復(fù)的新型人工復(fù)合骨水泥,尤其能夠作為骨質(zhì)疏松壓縮性骨折的骨修復(fù)材料。方法:1.通過(guò)W/O/W微球制備法自制聚乳酸-羥基乙酸共聚物空白微球（PLGA空白微球）,稱(chēng)重分裝并紫外線滅菌備用,按特定比例加入復(fù)合骨水泥;采用Urist等方法利用兔四肢長(zhǎng)骨干經(jīng)粉碎、脫脂脫鈣等處理后制得骨基質(zhì)明膠骨粉（BMG）,將骨基質(zhì)明膠骨粉稱(chēng)重分裝并環(huán)氧乙烷滅菌備用。2.依據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在磷酸鈣骨水泥（CPC）與骨基質(zhì)明膠骨粉按5:1混合的基礎(chǔ)上再按總重量的5%加入PLGA空白微球,再與固化液均勻攪拌,注射進(jìn)預(yù)制的塑料模具制成圓柱狀的新型磷酸鈣復(fù)合骨水泥,同理制得單純的CPC組、及不含微球的復(fù)合骨水泥組,并通過(guò)完全培養(yǎng)基的浸泡后制成三組材料的浸提液。3.選用3周齡左右體重在80-100g的SD大鼠,在分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞時(shí)采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法,通過(guò)三次... 

【文章來(lái)源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瑞邦骨肽及塑料模具ABC

圖 2 制備的實(shí)驗(yàn)原材料及復(fù)合骨水泥Figure 2 The raw material and different kinds of artificial composite calcium phosphate bonecement.A 為經(jīng)過(guò)環(huán)氧乙烷滅菌處理的骨基質(zhì)明膠，呈現(xiàn)淡黃色；B 是經(jīng) W/O/W 微球制備法自制的 PLGA 空白微球，呈白色粉末狀；C 脫模后的圓柱狀各型骨水泥。4 主要試劑盒堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒（南京建成生物制品公司）、CCK8 細(xì)胞毒性增殖試劑盒（500T，東仁化學(xué)生物制品公司）、茜素紅染液（sigma 公司）5 實(shí)驗(yàn)方法5.1 實(shí)驗(yàn)組各型骨水泥浸提液的制備由于骨水泥不能溶于水，對(duì)后期相關(guān)指標(biāo)的測(cè)量帶來(lái)障礙，故浸提液

結(jié) 果. 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)情況原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一般在接種后數(shù)小時(shí)后便開(kāi)始貼壁，形態(tài)尚不均一，可呈紡錘形、梭形甚至多角形。接種后 2-3 天換液一次，換液過(guò)程使用1%的PBS液沖洗3次，此過(guò)程也可不斷純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞將一些無(wú)貼壁性質(zhì)的骨髓細(xì)胞除去，通常原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。經(jīng)傳代后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)活躍，5-7 天即可鋪滿瓶底，多為長(zhǎng)梭形，形態(tài)均一，細(xì)胞團(tuán)可呈旋渦狀生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)所用即是 P3 代細(xì)胞（見(jiàn)圖 3）

【參考文獻(xiàn)】：
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