本文基于原子力顯微鏡,結(jié)合量子點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)、激光掃描共聚焦顯微鏡以及流式細(xì)胞儀等生物檢測(cè)技術(shù)和密度梯度離心法、陽(yáng)性和陰性磁珠分選法等分離方法,以正常健康人和慢性淋巴白血病患者的外周血B淋巴細(xì)胞作為研究對(duì)象,在高分辨的納米尺度下從不同角度研究這兩種細(xì)胞的生物物理特性,即細(xì)胞形態(tài)及膜納米結(jié)構(gòu)、膜表面粘附特性、楊氏模量、抗原-抗體之間特異性相互作用力、膜表面抗原分子的分布情況等。主要獲得了以下具有創(chuàng)新性的成果：1)與正常B淋巴細(xì)胞相比,慢性淋巴白血病B淋巴細(xì)胞高大,膜表面納米結(jié)構(gòu)更加粗糙,非特異性粘附力和硬度都明顯減小。通過(guò)修飾CD20抗體的AFM針尖測(cè)出CD20抗原-抗體的相互作用力比未修飾抗體針尖測(cè)得的非特異性粘附力大5倍,并依據(jù)抗原抗體特異性作用力的測(cè)量,得出CD20分子在正常CD20+B淋巴細(xì)胞膜上分布比較均勻,小部分有聚集現(xiàn)象,相反,在慢淋CD20+B淋巴細(xì)胞膜表面分布稀疏。表明應(yīng)用AFM可在形態(tài)學(xué)和機(jī)械性能上明顯區(qū)分正常和慢性淋巴白血病B淋巴細(xì)胞,為臨床診斷慢性淋巴白血病提供新的手段,B淋巴細(xì)胞上的CD20分布可以作為抗原CD20用藥選擇參考。2)隨著超抗原SAC刺激時(shí)間增加,1.... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 緒論
    第一節(jié) 原子力顯微鏡簡(jiǎn)介
        1.1 原子力顯微鏡的山來(lái)
        1.2 原子力顯微鏡的基本原理
        1.3 原子力顯微鏡的工作模式
    第二節(jié) 在原子力顯微鏡在細(xì)胞成像方面的應(yīng)用
        2.1 研究單細(xì)胞的意義
        2.2 單細(xì)胞成像
    第三節(jié) AFM單分子力譜測(cè)量在細(xì)胞方面的應(yīng)用
        3.1 測(cè)定細(xì)胞粘附力和彈性
        3.2 單分子力譜在細(xì)胞特異性分子相互作用中的應(yīng)用
    展望
    研究創(chuàng)新點(diǎn)和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 原子力顯微鏡探測(cè)人正常和慢淋B淋巴細(xì)胞
    1 引言
    2 試劑材料與方法
        2.1 試劑材料
        2.2 儀器
        2.3 細(xì)胞樣品制備
        2.4 AFM樣品制備
        2.5 原子力顯微鏡掃描
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 原了力顯微鏡對(duì)正常和慢淋B淋巴細(xì)胞的形貌與膜納米結(jié)構(gòu)的表征
        3.2 原了力顯微鏡測(cè)定正常和慢淋B淋巴細(xì)咆的力學(xué)性質(zhì)
        3.3 正常和慢性淋巴白血病B淋巴細(xì)胞的楊氏模量分析
    小章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 B淋巴細(xì)胞膜CD20抗原的分布與單分子力譜探測(cè)
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 試劑和儀器
        2.2 方法
    3 結(jié)果與討論
        3.1 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴細(xì)胞的熒光成像
        3.2 正常和B-CLL外周血CD20~+B淋巴細(xì)胞形態(tài)及CD20抗原-抗體特異性相互作用力的AFM分析
    本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 SAC刺激慢性淋巴白血病B淋巴細(xì)胞的原子力觀察
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料和儀器
        2.2 細(xì)胞分離培養(yǎng)
        2.3 AFM樣品制備
        2.4 增殖實(shí)驗(yàn)
        2.5 原子力顯微鏡成像及力譜測(cè)定
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        3.2 刺激細(xì)胞形貌分析
        3.3 刺激B淋巴細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)分析
        3.4 B淋巴細(xì)胞膜納米力學(xué)性能測(cè)量
    4 討論
    本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 有絲分裂原誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞形貌及生物力學(xué)分析
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 材料
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 純化B淋巴細(xì)胞
        2.4 掃描激光共聚焦顯微鏡
        2.5 細(xì)胞染色和流式細(xì)胞分析
        2.6 原子力顯微鏡成像及力學(xué)測(cè)定
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 倒置熒光顯微鏡觀察B淋巴細(xì)胞
        3.2 抗原誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞活化
        3.3 細(xì)胞周期檢測(cè)
        3.4 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度檢測(cè)
        3.5 靜息和活化B淋巴細(xì)胞形貌和納米結(jié)構(gòu)變化
        3.6 活化B淋巴細(xì)胞的粘附力變化
        3.7 細(xì)胞骨架蛋白F-actin檢測(cè)
        3.8 細(xì)胞膜電位檢測(cè)
    本章總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
附錄1 英文縮略語(yǔ)表
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期問(wèn)參加科研工作基本情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-BCL 11B電轉(zhuǎn)染幼稚T細(xì)胞的可視化研究[J]. 龔超群,郜世雋,蔡繼業(yè),王秋蘭.  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2009(12)
[2]原子力顯微鏡對(duì)中性粒細(xì)胞與K562細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及機(jī)械性能的探測(cè)[J]. 黃訓(xùn),金花,趙宏霞,伍時(shí)縣,蔡繼業(yè).  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2009(11)
[3]基于原子力顯微鏡的人外周血CD8+T細(xì)胞形貌觀察與力譜分析[J]. 黃飛程,郜世雋,邱思遠(yuǎn),蔡繼業(yè).  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2009(10)
[4]應(yīng)用原子力顯微鏡分析正常淋巴細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞的形態(tài)和機(jī)械性質(zhì)[J]. 蔡小芳,蔡繼業(yè),董世松,鄧華,胡明鉛.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(07)
[5]單細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的原子力顯微鏡研究[J]. 朱杰,孫潤(rùn)廣.  生命科學(xué)儀器. 2005(02)



本文編號(hào)：3573372