兒童脂肪干細胞的成骨誘導(dǎo)及其復(fù)合膠原羥基磷灰石支架的生物相容性的實驗研究
本文關(guān)鍵詞:兒童脂肪干細胞的成骨誘導(dǎo)及其復(fù)合膠原羥基磷灰石支架的生物相容性的實驗研究,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:第一部分兒童脂肪干細胞的分離培養(yǎng)及向成骨細胞誘導(dǎo) [摘要]目的:研究從兒童脂肪組織中分離培養(yǎng)脂肪干細胞,進行觀察和鑒定,為后續(xù)實驗提供種子細胞。方法:收集手術(shù)中棄用切除的脂肪組織,使用酶消化后,通過密度梯度離心獲得兒童脂肪干細胞,進行體外分離和培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況, MTT法測定細胞生長活性,流式細胞儀檢測細胞表面標志物。選第三代脂肪干細胞向成骨細胞誘導(dǎo)后,進行Von Kossa染色鈣化結(jié)節(jié)和堿性磷酸酶檢測。結(jié)果:成功的在體外分離培養(yǎng)出兒童脂肪源性干細胞,連續(xù)傳至20代。MTT法顯示細胞生長旺盛;表面標志CD44,CDl05呈陽性高表達,CD34,CD45呈陰性低表達。將其誘導(dǎo)分化為成骨細胞,進行Von Kossa染色鈣化結(jié)節(jié)、堿性磷酸酶檢測的結(jié)果都為陽性。結(jié)論:經(jīng)體外分離培養(yǎng)、觀察和進行有關(guān)鑒定,證實所培養(yǎng)出來的是脂肪干細胞,成功將其誘導(dǎo)為成骨細胞。 第二部分膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備和表征 [目的:制備I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料并對其進行表征。方法:將羥基磷灰石分散液和牛腱I型膠原溶脹液依照特定的比例配制支架材料模擬天然骨,利用光學(xué)儀器對其進行觀察和表征。結(jié)果:利用掃描電子顯微鏡,透射電子顯微鏡,紅外光譜,X射線衍射對材料進行考察。證明了該支架具有良好的承載能力和力學(xué)性能。結(jié)論:我們制備的I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料具有與天然骨相似的特征,為后續(xù)實驗中的種子細胞提供了載體基礎(chǔ)。 第三部分成骨誘導(dǎo)兒童脂肪干細胞復(fù)合膠原/羥基磷灰石支架的生物相容性的實驗評價 目的:將制備的I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料結(jié)合兒童脂肪干細胞進行體外體內(nèi)的相容性實驗。方法:I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架與第三代成骨誘導(dǎo)的兒童脂肪干細胞復(fù)合培養(yǎng),在倒置顯微鏡下觀察支架材料對細胞的影響;進行支架材料的細胞毒性實驗。皮內(nèi)注射支架材料浸提液觀察注射后的變化;另外,在SD大鼠體內(nèi)包埋二組支架材料:實驗組,支架材料結(jié)合細胞;對照組,支架材料。2、4、6、8、10周處死動物后,進行大體形態(tài)、影像學(xué)和組織學(xué)檢查。結(jié)果:體外復(fù)合培養(yǎng)顯示,在三個不同的時間點貼壁細胞生長良好、生長旺盛;支架材料無毒性。體內(nèi)實驗,1.皮內(nèi)注射實驗,實驗組和對照組無明顯差異。2.大體形態(tài)觀察,在術(shù)后2周二組大體形態(tài)差異不明顯。術(shù)后6、10周實驗組的支架材料形態(tài)結(jié)構(gòu)大體存在;對照組的大體形態(tài)不復(fù)存在,僅見支架材料的少量殘余。3.影像學(xué)檢查:X線透視顯示,實驗組的植入物密度逐漸增高,對照組的植入物密度降低、形態(tài)模糊。4.組織學(xué)檢查(HE染色),二組前4周的情況相似,都為炎癥細胞侵潤和組織包裹,毛細血管長入。8周時二組炎癥反應(yīng)基本消失,實驗組中出現(xiàn)類成骨細胞,對照組主要是肉芽包裹和少量脂肪細胞。10周實驗組中出現(xiàn)類新生骨形成。對照組表現(xiàn)為材料降解吸收。結(jié)論:I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料結(jié)合成骨誘導(dǎo)的兒童脂肪干細胞在體內(nèi)外具有良好的生物相容性,而且具有成骨潛能。
【關(guān)鍵詞】:骨組織工程 生物相容性 兒童脂肪干細胞 成骨誘導(dǎo) I型膠原/羥基磷灰石
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:R726.8;R318.08
【目錄】:
- 中文摘要4-6
- Abstract6-9
- 引言9-11
- 第一部分 兒童脂肪干細胞的分離培養(yǎng)及向成骨細胞誘導(dǎo)11-22
- 前言11
- 一、材料11
- 二、主要實驗試劑和儀器11-12
- 三、實驗方法12-15
- 四、結(jié)果15-16
- 五、討論16-18
- 六、結(jié)論18-19
- 參考文獻19-22
- 第二部分 膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備和表征22-32
- 前言22
- 一、實驗材料22-23
- 二、實驗方法23-24
- 三、結(jié)果24-26
- 討論26-28
- 結(jié)論28-29
- 參考文獻29-32
- 第三部分 兒童脂肪干細胞復(fù)合膠原/羥基磷灰石支架的體內(nèi)外生物相容性的實驗評價32-42
- 前言32
- 一、實驗材料和儀器32-33
- 二、實驗方法33-35
- 三、結(jié)果35-37
- 四、討論37-39
- 五、結(jié)論39-40
- 參考文獻40-42
- 附圖42-52
- 綜述 脂肪干細胞在骨組織工程中的研究進展52-61
- 參考文獻57-61
- 附錄61-62
- 攻讀碩士研究生期間發(fā)表文章62-63
- 致謝63-65
【參考文獻】
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本文關(guān)鍵詞:兒童脂肪干細胞的成骨誘導(dǎo)及其復(fù)合膠原羥基磷灰石支架的生物相容性的實驗研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:350322
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