目的:對兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外瓊脂糖凝膠滾壓培養(yǎng);探討滾壓載荷對軟骨組織體外構(gòu)建的可行性。方法:1細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定:無菌條件下取四周齡健康新西蘭白兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨,應(yīng)用分階段酶消化法,分離提取軟骨細(xì)胞,20%胎牛血清的HG-DMEM作為細(xì)胞培養(yǎng)基,在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng),每3天換液一次。取第3代軟骨細(xì)胞,進(jìn)行甲苯胺藍(lán)、番紅O-固綠、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色,以用作對軟骨細(xì)胞的初步鑒定。2以分離提取的兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞為種子細(xì)胞,以瓊脂糖凝膠為支架,構(gòu)建細(xì)胞/支架復(fù)合體。將細(xì)胞/支架共同培養(yǎng)48小時后,電鏡觀察支架內(nèi)軟骨細(xì)胞的黏附、生長情況。設(shè)置實(shí)驗(yàn)組A （8例）和對照組B （8例）,實(shí)驗(yàn)組滾壓動態(tài)加載培養(yǎng)（每天定時滾壓加載20min）,對照組正常體外靜態(tài)培養(yǎng)。4周后觀察標(biāo)本大體形態(tài),并對實(shí)驗(yàn)組和對照組進(jìn)行HE染色和Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色,應(yīng)用Image-pro plus對Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色切片行Ⅱ型膠原半定量分析。結(jié)果:1細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和鑒定:原代培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞貼壁較慢,24-36小時才開始貼壁變形。其外形多為多邊形,胞漿豐富,胞核圓形,居中,有2-3... 

【文章來源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
資料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表的文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的瓊脂糖凝膠培養(yǎng)及其力學(xué)性質(zhì)的研究[J]. 董江峰,李曉娜,陳維毅.  醫(yī)用生物力學(xué). 2007(04)
[2]力學(xué)因素在功能性軟骨組織工程學(xué)中的作用[J]. 李春江,衛(wèi)小春.  生物骨科材料與臨床研究. 2007(03)
[3]力學(xué)生物學(xué)在骨與軟骨研究中的應(yīng)用[J]. 戴尅戎.  中華骨科雜志. 2006(06)
[4]兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的獲取及培養(yǎng)[J]. 尹寶英,李裕強(qiáng),張浩,溫葉飛,張涌.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2006(05)
[5]組織工程生物反應(yīng)器的生物力學(xué)[J]. 樊瑜波,陶祖萊.  醫(yī)用生物力學(xué). 2005(04)
[6]膠原酶一次消化法培養(yǎng)兔軟骨細(xì)胞[J]. 寧旭,尚顯文,尹培榮,吳承龍.  貴州醫(yī)藥. 2004(06)
[7]組織工程化軟骨的應(yīng)力-應(yīng)變研究[J]. 王躍,楊志明,解慧琪,李勝富.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2001(02)
[8]生物力學(xué)與骨組織工程[J]. 王遠(yuǎn)亮,蔡紹皙.  力學(xué)進(jìn)展. 1999(02)



本文編號：3501370