本文關鍵詞：圖案化纖維膜支架上血管相關細胞共培養(yǎng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：成熟血管主要由形成內(nèi)腔的內(nèi)皮細胞層和平滑肌細胞層組成,其中平滑肌細胞層中細胞定向排列,以提供力學強度和調(diào)控血管壁厚度。為模擬血管的組成和結構,本論文利用靜電紡絲技術和光刻蝕技術制備具有脊溝結構的圖案化纖維膜。圖案化纖維膜用于種植血管平滑肌細胞(SMC),平板纖維膜用于種植血管內(nèi)皮細胞(EC),實施共培養(yǎng)。研究結果表明,SMC在圖案化纖維膜上培養(yǎng)后,細胞生長和細胞外基質(zhì)分泌主要匯集于圖案化纖維膜的脊區(qū)域,并具有一定的排列走向,同時SMC遷移滲透進入圖案化纖維膜內(nèi)部。相對于內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞在纖維上的單獨培養(yǎng),共培養(yǎng)促進了EC和SMC的增殖、EC分泌層粘連蛋白(LN)和IV型膠原(Col Ⅳ)、SMC分泌α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和I型膠原(Col-I)；相對于EC,共培養(yǎng)對SMC增殖和細胞外基質(zhì)分泌的促進作用更為明顯。 培養(yǎng)功能化血管組織須在體系中提供充分的生化信號分子,其中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是促進EC和SMC黏附生長的重要因素之一。據(jù)此,本論文利用編碼VEGF和bFGF的質(zhì)粒與磷酸鈣(CaP)形成復合納米粒子,構建攜載CaP/pDNA復合粒子的圖案化纖維膜與平板纖維膜,實施EC和SMC的共培養(yǎng)。結果表明在纖維上共培養(yǎng)EC和SMC,載CaP/pDNA復合粒子的引入促進了EC和SMC的增殖、EC胞外基質(zhì)LN和Col-Ⅳ的分泌、SMC胞外基質(zhì)α-SMA和Col-I的分泌；在圖案化纖維上SMC顯示出較好的取向性,載CaP/pDNA復合粒子的引入促進了SMC在纖維支架中的滲透,顯示出共培養(yǎng)體系下圖案化因素和生化因子相結合對細胞行為的影響更為顯著。 通過將人臍帶EC和SMC分別接種到纖維膜上,構建了體外血管培養(yǎng)裝置。結果表明血管培養(yǎng)2個月后內(nèi)皮細胞在支架內(nèi)層形成連續(xù)的血管內(nèi)腔,平滑肌細胞滲透進入纖維支架內(nèi)部,內(nèi)皮層和平滑肌層緊密連接；同時平滑肌細胞及分泌胞外基質(zhì)呈定向排列,較好地模擬了血管的結構。力學性能測試表明培養(yǎng)2個月后血管的徑向順應性為0.56%/100mm Hg、爆破強度為650mm Hg,離正常血管還有一定的差距,有待進一步提高體外構建血管的生物力學性能。
【關鍵詞】：圖案化電紡纖維膜 細胞共培養(yǎng) 磷酸鈣/質(zhì)粒復合納米粒子 人工血管 血管組織工程
【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 血管組織工程12-14
• 1.1.1 血管組織工程支架13
• 1.1.2 攜載活性物質(zhì)的血管組織工程支架13-14
• 1.2 靜電紡聚合物纖維膜14-15
• 1.2.1 靜電紡纖維在組織工程中的應用14
• 1.2.2 靜電紡纖維結構和形貌的調(diào)控14-15
• 1.3 圖案化組織工程支架15-16
• 1.3.1 圖案化組織工程支架的特點15-16
• 1.3.2 圖案化組織工程支架的制備方法16
• 1.4 細胞共培養(yǎng)16-18
• 1.4.1 細胞共培養(yǎng)的方法17-18
• 1.4.2 圖案化支架上細胞的共培養(yǎng)18
• 1.5 磷酸鈣納米粒子作為基因載體18-19
• 1.5.1 磷酸鈣納米粒子作為基因載體的特點18-19
• 1.5.2 載DNA磷酸鈣納米粒子的研究進展19
• 1.6 課題的立題意義和研究內(nèi)容19-22
• 1.6.1 課題的來源19
• 1.6.2 本課題的研究目的和意義19-20
• 1.6.3 本課題的研究內(nèi)容20
• 1.6.4 本課題的創(chuàng)新點20-22
• 第2章 圖案化纖維膜上細胞的共培養(yǎng)22-37
• 2.1 實驗部分22-27
• 2.1.1 實驗材料22-23
• 2.1.2 圖案化接收板的設計和制作23
• 2.1.3 圖案化纖維膜的制備23-24
• 2.1.4 圖案化纖維膜的表征24
• 2.1.5 細胞培養(yǎng)24
• 2.1.6 細胞在纖維膜的培養(yǎng)24-25
• 2.1.7 細胞在圖案化纖維膜上的粘附及增殖25
• 2.1.8 細胞在圖案化纖維膜上的分布25-26
• 2.1.9 細胞共培養(yǎng)體系中細胞外基質(zhì)的分泌26-27
• 2.1.10 細胞共培養(yǎng)體系中細胞的骨架27
• 2.1.11 統(tǒng)計學分析27
• 2.2 結果與分析27-36
• 2.2.0 圖案纖維膜的形貌及纖維排列特點27-29
• 2.2.1 圖案化纖維的疊加29
• 2.2.2 細胞在圖案化纖維膜上的分布29-30
• 2.2.3 細胞在纖維膜上增殖30-32
• 2.2.4 細胞在纖維膜上細胞外基質(zhì)的分泌32-35
• 2.2.5 細胞在纖維支架中的滲透35
• 2.2.6 纖維上細胞骨架的排列35-36
• 2.3 本章小結36-37
• 第3章 載CaP/pDNA粒子圖案化纖維膜上細胞的共培養(yǎng)37-47
• 3.1 實驗部分37-39
• 3.1.1 實驗材料37
• 3.1.2 CaP/pDNA復合納米粒子的制備及表征37
• 3.1.3 載CaP/pDNA復合納米粒子圖案化纖維膜的制備37-38
• 3.1.4 細胞在電紡纖維膜上的接種38
• 3.1.5 細胞在攜載復合粒子圖案化纖維膜上共培養(yǎng)時的生長行為38
• 3.1.6 載pDNA纖維膜上細胞共培養(yǎng)的細胞外基質(zhì)分泌38-39
• 3.1.7 載pDNA纖維膜上細胞共培養(yǎng)的細胞骨架39
• 3.1.8 統(tǒng)計學分析39
• 3.2 結果與討論39-46
• 3.2.1 CaP/pDNA復合納米粒子的表征39-40
• 3.2.2 載CaP/pDNA復合納米粒子圖案化纖維膜的表征40-41
• 3.2.3 細胞生長行為的表征41-42
• 3.2.4 細胞在在纖維膜中的滲透42-43
• 3.2.5 細胞在纖維膜上細胞外基質(zhì)的分泌43-46
• 3.2.7 細胞在纖維膜上的細胞骨架46
• 3.3 本章小結46-47
• 第4章 圖案化纖維支架體外構建血管的初步研究47-54
• 4.1 實驗部分47-49
• 4.1.1 實驗材料47
• 4.1.2 實驗裝置的制備47-48
• 4.1.3 人工血管的體外培養(yǎng)48
• 4.1.4 組織學觀察48
• 4.1.5 生物力學性能檢測48-49
• 4.2 結果與討論49-52
• 4.2.1 體外培養(yǎng)人工血管的過程49
• 4.2.2 細胞在纖維支架上的分布49-52
• 4.2.3 血管的生物力學性能52
• 4.3 本章小結52-54
• 全文結論54-56
• 致謝56-57
• 參考文獻57-64
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 于學軍,何作云,王曉燕,高凌云,牟嬌,楊生平,董瓊蘭;血管內(nèi)皮-平滑肌細胞雙層聯(lián)合培養(yǎng)模型的改進[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年06期

2 陳威中;吳滿平;;人臍動脈內(nèi)皮細胞-平滑肌細胞共培養(yǎng)模型的建立及鑒定[J];復旦學報(醫(yī)學版);2009年06期

3 李玉潔;楊慶;翁小剛;陳穎;阮從瀟;李丹;朱曉新;;血管內(nèi)皮細胞-平滑肌細胞共培養(yǎng)體系研究進展[J];中國中藥雜志;2012年03期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳芳;攜載質(zhì)粒/磷酸鈣粒子的聚合物纖維作為血管組織工程支架的研究[D];西南交通大學;2012年

  本文關鍵詞：圖案化纖維膜支架上血管相關細胞共培養(yǎng)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345747