背景:隨著生物工程技術(shù)的不斷發(fā)展,生物活性玻璃陶瓷在促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)與重建方面發(fā)揮了重大作用。Hedgehog/Smo/Gli1信號(hào)通路作為骨發(fā)育及生長(zhǎng)的重要調(diào)節(jié)信號(hào)通路,目前關(guān)于生物活性玻璃陶瓷涂層與Hedgehog/Smo/Gli1信號(hào)通路之間作用機(jī)制的研究尚少。目的:探討生物活性玻璃陶瓷涂層通過Hedgehog/Smo/Gli1信號(hào)通路促進(jìn)骨髓干細(xì)胞成骨的機(jī)制。方法:1.采用熔爐法制備生物活性玻璃陶瓷（BGC）涂層材料,利用掃描及透射電子顯微鏡觀察涂層形態(tài)。2.提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提純并培養(yǎng),接種于生物活性玻璃陶瓷（BGC）涂層上,采用免疫熒光染色檢測(cè)ki-67,RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡方法檢測(cè)成骨細(xì)胞特異性標(biāo)記物BMP2、Osteocalcin、ALP和Runx2及Hedgehog信號(hào)通路核心轉(zhuǎn)錄因子Gli和Smo蛋白表達(dá)。3.使用Hedgehog信號(hào)通路拮抗劑Cyclopamine后觀察Hedgehog信號(hào)通路核心轉(zhuǎn)錄因子Gli和Smo蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.掃描電鏡下見BGC涂層表面無(wú)裂紋,光滑均勻致密,透射電鏡下見BGC涂層呈均勻細(xì)顆粒樣,顆粒之間構(gòu)成致密的介孔結(jié)構(gòu),相互交錯(cuò)呈現(xiàn)... 

【文章來(lái)源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２電鏡下細(xì)胞形態(tài)多呈梭形，部分呈旋渦狀及放射狀排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??

通常情況下觀察物體的超微結(jié)構(gòu)都是通過掃描電鏡和透射電鏡，不同的是掃??描電鏡通過二次電子和背景散射電子成像。透射電鏡通過透射電子成像。在實(shí)驗(yàn)??中掃描電子顯微鏡下見ＢＧＣ涂層表面光滑無(wú)裂紋，均勻致密（圖１Ａ）。透射電鏡下??見ＢＧＣ涂層呈均勻細(xì)顆粒樣，顆粒之間構(gòu)成致密的介孔結(jié)構(gòu)，相互交錯(cuò)呈現(xiàn)出蜂??窩多孔狀（圖１Ｂ）。掃描電子顯微鏡見側(cè)面ＢＧＣ涂層介孔厚度約為３５０ｎｍ?（圖１Ｃ）。??通過掃描電鏡和透射電鏡結(jié)構(gòu)可知生物活性玻璃陶瓷涂層具有多孔樣結(jié)構(gòu)，利于??種子細(xì)胞生長(zhǎng)。??漏??圖１電鏡下生物活性玻璃陶瓷涂層的形態(tài)及結(jié)構(gòu)；Ａ為ＢＧＣ涂層表面掃描電??子顯微鏡圖像；Ｂ為ＢＧＣ涂層介孔結(jié)構(gòu)透射電鏡圖像；Ｃ為ＢＧＣ介孔涂層側(cè)面透??射電鏡圖像??３．２骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)特征??由髓腔內(nèi)提取的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)后骨髓間充質(zhì)??干細(xì)胞在２４小時(shí)后開始貼壁，呈現(xiàn)出有絲分裂狀態(tài)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。繼續(xù)培??養(yǎng)４８小時(shí)后細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量達(dá)到培養(yǎng)皿８０％左右，形態(tài)規(guī)則，呈均一狀態(tài)，部分呈??梭形及旋渦狀。??■■??圖２電鏡下細(xì)胞形態(tài)多呈梭形，部分呈旋渦狀及放射狀排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??１３??

白質(zhì)印跡法檢測(cè)成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)??入Ｈｈ通路阻斷劑Ｃｙｃ丨ｏｐａｍｉｎｅ后Ｇ丨ｉｌ、Ｓｍｏ的ｄｇｅｈｏｇ通路阻斷劑Ｃｙｃｌｏｐａｍｉｎｅ后的對(duì)照組，Ｇｌ加抑制劑對(duì)照組；加入Ｈｈ通路阻斷劑Ｃｙｃｌｏｐａｍｌｉｌ、Ｓｍｏ相對(duì)表達(dá)水平明顯低于未加抑制劑的兩種變化均呈現(xiàn)出時(shí)間依賴性。??＿ｃｙｃｌｏｐａｍｍｅ?ｓｍｏＯ．Ｕ?－｜?Ｉ?５．０?？４．０?－??ｊ?３．０－??２．０－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]孔隙結(jié)構(gòu)可控的三維多孔細(xì)胞支架研制[D]. 亓倩倩.重慶大學(xué) 2011
[3]AW生物活性玻璃陶瓷多孔支架材料制備及性能研究[D]. 肖斌.四川大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3331027