目的:探討轉(zhuǎn)錄抑制因子——鋅指蛋白和同源框3（zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3）基因沉默對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stem cells,BMSCs）中BMP2/smad通路相關(guān)因子骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）、磷酸化smad1（phospho-smad1（或pho-smad1））表達(dá)的影響。方法:構(gòu)建ZHX3低表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs,同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照空載病毒轉(zhuǎn)染BMSCs及空白對(duì)照不做任何處理的BMSCs。采用熒光顯微鏡下測(cè)定細(xì)胞轉(zhuǎn)染率、免疫印跡技術(shù)鑒定轉(zhuǎn)染效果、免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫印跡技術(shù)定性定量檢測(cè)ZHX3沉默時(shí)BMP2、pho-smad1和smad4的表達(dá)情況。細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)液處理后進(jìn)行堿性磷酸酶和茜素紅染色檢測(cè)各組細(xì)胞成骨能力。結(jié)果:1復(fù)蘇培養(yǎng)的細(xì)胞具有BMSCs形態(tài)。2轉(zhuǎn)染后,ZHX3低表達(dá)組和空載體對(duì)照組均表達(dá)綠色熒光,轉(zhuǎn)染率分別為（93.18±4.41）%和（92.56±4.35）%,空白對(duì)照組不表達(dá)熒光,未見轉(zhuǎn)染陽性細(xì)胞（F=1 123.464,P<0... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016,41(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 SD大鼠BMSCs的復(fù)蘇培養(yǎng)與傳代
        1.2.2 一般狀態(tài)觀察及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)檢測(cè)
        1.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs及鑒定
        1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組
        1.2.5 免疫熒光法檢測(cè)BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達(dá)
        1.2.6免疫印跡法檢測(cè)BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達(dá)
        1.2.7 BMSCs的誘導(dǎo)分化
        1.2.8 茜素紅染色
        1.2.9 堿性磷酸酶染色
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 BMSCs的培養(yǎng)
    2.2 一般狀態(tài)觀察及MTT檢測(cè)
    2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs及鑒定
    2.4 免疫熒光檢測(cè)BMP2、phos-smad1和smad4表達(dá)情況
    2.5 免疫印跡檢測(cè)BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達(dá)
    2.6 茜素紅染色
    2.7 堿性磷酸酶染色
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Osteogenic differentiation of amniotic fluid mesenchymal stromal cells and their bone regeneration potential[J]. Caterina Pipino,Assunta Pandolfi.  World Journal of Stem Cells. 2015(04)
[2]ZHX3基因轉(zhuǎn)染BMSCs及對(duì)體外成骨能力的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 李季,秦書儉,包翠芬,�，幉�,屈惠瑩.  中國臨床解剖學(xué)雜志. 2014(02)
[3]成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)、鑒定與成骨誘導(dǎo)[J]. 張銘杰,張慶文,何偉,陳鎮(zhèn)秋,歐志學(xué),賈曉軍.  中國組織工程研究. 2013(45)



本文編號(hào)：3181658