背景:結(jié)合物理因素與支架材料建立共培養(yǎng)體系并采用細(xì)胞因子誘導(dǎo),成為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的熱點(diǎn)。目的:觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白7復(fù)合國(guó)產(chǎn)多孔鉭對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨向分化的影響。方法:分離培養(yǎng)SD大鼠（由北京華阜康生物提供）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,分組干預(yù):①實(shí)驗(yàn)組加入多孔鉭片,對(duì)照組不加多孔鉭片,培養(yǎng)第5天,鬼筆環(huán)肽染色觀察多孔鉭片表面的細(xì)胞生長(zhǎng)情況;培養(yǎng)1,3,5,7 d,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖;②A組加入軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液,B組加入軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液與骨形態(tài)發(fā)生蛋白7,C組加入國(guó)產(chǎn)多孔鉭材料與軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液,D組加入國(guó)產(chǎn)多孔鉭材料與軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液和骨形態(tài)發(fā)生蛋白7,培養(yǎng)第7,14,21天,采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原、SRY型高遷移率族蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶13的水平,Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞中Ⅱ型膠原、SRY型高遷移率族蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶13的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。結(jié)果與結(jié)論:①鬼筆環(huán)肽染色顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在多孔鉭表面及周?chē)L(zhǎng)及增殖良好;②實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)3,5 d的增殖慢于對(duì)照組（P <0.05）,培養(yǎng)1,7 d的增殖與對(duì)照組無(wú)差異... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)組織工程研究. 2020,24(16)北大核心

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流式檢測(cè)第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞表面標(biāo)志

前期工作已證明國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料具備良好的生物相容性，利于軟骨細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)[20]，但其促骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨向分化的作用尚不明確。實(shí)驗(yàn)選取的第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞流式細(xì)胞儀鑒定成功[21-25]。CCK-8檢測(cè)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)前3 d，兩組細(xì)胞增殖較緩，第3-7天兩細(xì)胞呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)在初期(3,5 d)優(yōu)于實(shí)驗(yàn)組，后期(7 d)兩組細(xì)胞增殖無(wú)明顯差異，提示國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架材料與髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞相容性良好，與相關(guān)研究結(jié)果一致[26]。圖5 各組細(xì)胞中Ⅱ型膠原、SRY型高遷移率族蛋白及基質(zhì)金屬蛋白酶13蛋白的表達(dá)

圖5 各組細(xì)胞中Ⅱ型膠原、SRY型高遷移率族蛋白及基質(zhì)金屬蛋白酶13蛋白的表達(dá)Ⅱ型膠原是軟骨細(xì)胞的特征性蛋白，SRY型高遷移率族蛋白與軟骨的合成密切相關(guān)，其基因轉(zhuǎn)錄可明顯促進(jìn)軟骨合成[27-28]。有學(xué)者以腺病毒介導(dǎo)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因轉(zhuǎn)染豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，軟骨細(xì)胞內(nèi)SRY型高遷移率族蛋白和Ⅱ型膠原基因表達(dá)逐漸增加，較不轉(zhuǎn)染組誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞基因表達(dá)更強(qiáng)[29]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，骨形態(tài)發(fā)生蛋白7誘導(dǎo)組SRY型高遷移率族蛋白和Ⅱ型膠原分泌量明顯多于無(wú)因子誘導(dǎo)組，國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架組明顯多于無(wú)支架組，骨形態(tài)發(fā)生蛋白7復(fù)合國(guó)產(chǎn)多孔鉭組分泌量最多，提示骨形態(tài)發(fā)生蛋白7可協(xié)同國(guó)產(chǎn)多孔鉭利于SD大鼠髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)。國(guó)產(chǎn)多孔鉭的高孔隙率、低彈性模量、類(lèi)似骨松質(zhì)的微孔樣結(jié)構(gòu)，為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨向誘導(dǎo)及軟骨細(xì)胞的增殖提供力學(xué)支撐，其三維空間結(jié)構(gòu)利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的傳輸，利于細(xì)胞增殖生長(zhǎng)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白7可在體外促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)合成[30]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單純誘導(dǎo)組髓間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為軟骨細(xì)胞，誘導(dǎo)液加骨形態(tài)發(fā)生蛋白7因子組效果明顯好于單純誘導(dǎo)組，與其他研究結(jié)果一致[31]。在其他研究中采用的是細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)[30]，此次實(shí)驗(yàn)采用的是因子與材料復(fù)合培養(yǎng)，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中可嘗試基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，探究基因轉(zhuǎn)染組是否比誘導(dǎo)液加因子組復(fù)合國(guó)產(chǎn)多孔鉭對(duì)軟骨誘導(dǎo)更有利。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3131703