目的:自制細菌纖維素（Bacterial cellulose,BC）平面膜,經過脫水處理并測定其性能。同時利用模具制備BC血管并脫水處理,采用該BC血管構建家兔頸動脈移植模型,初步探討B(tài)C血管通暢率。而后在BC血管表面接枝內皮細胞特異性黏附分子REDV多肽,使用人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）進行細胞黏附實驗,制備內皮化BC血管,提高BC血管的血液相容性。方法:通過Hestrin&Schramm（HS）培養(yǎng)基培養(yǎng)木葡糖醋桿菌,制備BC平面膜,通過低溫析出法對BC材料進行脫水處理,采用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察BC表面納米纖維結構,萬能拉力試驗機測試BC材料力學性能,差示掃描熱量儀（DSC）實驗驗證脫水BC熱力學性能。在無菌操作臺下,將菌液灌注至2 mm醫(yī)用硅橡膠管道中,采用滲氧單管法制備小口徑BC人工血管。采用血管套管法對家兔頸動脈行BC血管置換手術,構建兔頸動脈移植模型,初步評價BC血管進行血管置換的可行性及通暢性。進一步地,采用2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物自由基（TEMPO）將BC羧基化,并通過碳化二亞胺（EDC）/N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）化學法將BC表面羧基進行... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BC材料萬能拉伸試驗示意圖

榻崾?褂?倍于麻醉劑量（90mg/kg）2%戊巴比妥鈉處死家兔。2.6BC材料的表面改性及細胞黏附為了便于內皮細胞與BC共培養(yǎng)，我們制備了BC平面膜，通過在BC平面膜表面培養(yǎng)細胞的方式來對BC材料的改性進行研究。將步驟2.3.3和2.3.4制備并洗凈脫水的BC膜于室溫下取出，首先將其置于TEMPO/NaBr/NaClO溶液中浸泡2min將BC表面羥基氧化為羧基，隨后浸入75%酒精停止反應，大量清水洗凈殘留物質。室溫下將氧化后的BC膜在EDC/NHS液中浸泡20min，以活化材料表面的羧基。最后將BC加入REDV溶液中浸泡至少30min，使REDV化學固定于材料表面（圖2）。反應結束后，將BC在乙醇胺溶液中浸泡10min，以鈍化剩余未結合多肽的羧基。大量超純水反復沖洗材料。將經上述步驟處理后的BC均勻剪成約2x2cm正方形小片放入12孔板中，平鋪于板底。用相應直徑的滅菌不銹鋼圈壓住BC膜邊緣使其固定于底面，使其培養(yǎng)過程中可以充分接觸細胞懸液。滅菌PBS清洗3次，后改用EGM-2培養(yǎng)基浸泡過夜。之后取出EGM-2浸泡液，并在每孔中加入0.5mL新鮮EGM-2培養(yǎng)基，0.5mLHUVECs細胞懸液（3×105/mL）與BC共培養(yǎng)，24h后換液，培養(yǎng)48h后取出。75%醫(yī)用酒精浸泡24h滅菌后大量超純水沖洗干凈。將以上材料分為未改性BC組（n=6），BC-REDV組（n=6）。在每孔中加入0.5mLEGM-2培養(yǎng)基，0.5mLHUVECs細胞懸液與BC共培養(yǎng)，24h后換液，培養(yǎng)48h后取出，行異硫氰酸熒光素-鬼筆環(huán)肽（Phalloidin-FITC）和4",6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色，并在熒光顯微鏡下對BC材料表面內皮細胞形態(tài)和數量進行觀察。圖2：BC材料表面TEMPO法改性示意圖。圖中紅色星型為REDV分子。Figure2.DiagramofBCsurfacemodifiedbyTEMPOmethod.RedstarstandsforREDV.

3實驗結果小口徑細菌纖維素人工血管的制備及性能研究163實驗結果3.1小口徑人工血管的制備3.1.1BC平面膜的制備木葡糖醋桿菌為好氧細菌，在無雜菌污染，28℃恒溫培養(yǎng)的情況下，接種的第一代種子細菌可于HS培養(yǎng)基中生長并形成菌落，將該菌液1:100繼續(xù)在不同形狀培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，即可制得不同形狀的BC膜（圖3）。圖3：接種于HS培養(yǎng)基，28℃恒溫培養(yǎng)后的木葡糖醋桿菌形成薄膜樣BC。Figure3.AcetobacterxylinumculturedinHSmediumfor36h,andBCwasformedinthemedium.3.1.2小口徑BC血管的制備制備小口徑血管的模具需具備良好的透氣性，并且模具需要管徑精確，管腔厚度一致才能生產出內徑一致，管壁均勻的小口徑人工血管。硅橡膠具有適中的透氣性，且管壁厚度均勻，內徑統一，因此我們選擇直徑為2mm的醫(yī)用硅橡膠管道作為模具（圖4）。將含菌種的培養(yǎng)基灌入硅橡膠管道中，封閉兩端，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間，即可獲得貼壁生長中空的BC管道（圖5）。


本文編號：3059777