第一部分香草醛交聯(lián)rhBMP-2/殼聚糖微球的制備及其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的影響研究背景：RhBMP-2是一種重要的骨誘導(dǎo)活性蛋白,它在體內(nèi)具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)骨組織生成的能力。而既往的研究表明rhBMP-2在體內(nèi)的釋放模式對(duì)其誘導(dǎo)成骨的作用具有重要的影響,rhBMP-2早期的突釋結(jié)合后期的持續(xù)釋放較短時(shí)間大劑量釋放能夠更高效的誘導(dǎo)骨組織生成。殼聚糖是一種來(lái)源廣泛的天然生物材料,具有良好的生物相容性,它可作為許多細(xì)胞因子的緩釋載體。同時(shí)香草醛與傳統(tǒng)的交聯(lián)劑（戊二醛等）相比生物相容性更好。因此用香草醛為交聯(lián)劑有可能制備出生物相容性更好,且具有良好緩釋性能的rhBMP-2/殼聚糖微球。目的：以香草醛為交聯(lián)劑來(lái)制備rhBMP-2/殼聚糖微球,明確該微球在體外rhBMP-2的緩釋性能,并且明確微球緩釋的rhBMP-2對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響。方法：利用乳化交聯(lián)法來(lái)制備包載rhBMP-2的殼聚糖微球,用電鏡觀(guān)察微球的形態(tài)。以微球浸提液為實(shí)驗(yàn)組,以空白培養(yǎng)基為對(duì)照組來(lái)培養(yǎng)人間充質(zhì)干細(xì)胞,以檢測(cè)微球的細(xì)胞毒性和對(duì)細(xì)胞增殖的影響。用動(dòng)態(tài)浸泡的方法來(lái)檢測(cè)rhBMP-2的體外釋放特征。通過(guò)比較緩釋3天和7天獲取的微球... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１：掃描電鏡觀(guān)察合成微球的形貌??．?－

??的釋放量最大（２５４．０６±％．１９ｎｇ／ｍＬ）（如圖２所示），呈現(xiàn)突釋效應(yīng)�；拢停校�??的釋放速度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降。到第１９天測(cè)得的緩釋液中ｒｈＢＭＰ－２的濃??度為２１６．?１４?＋?２０．?ＯＯｎｇ／ｍＬ。緩釋?zhuān)保固炖鄯e釋放的ｒｈＢＭＰ－２的含量約占３９．?６％。??３００?］??２５０?－?■■??－圓?ｉ??１?２００?－?＾?Ｔ?■??疆巧。Ａ丄Ｉ?Ｉ?Ｉ??ＩＩ??Ｑ?Ｊ＿＿＿１１Ｍ，，……Ｉ；纖齡Ｈ?ＨＨＬ???ｉｎｎ?１１１?ＨＨ?ＩＩＭ?ＨＨ．??１?３?５?７?１０?１４?１９??時(shí)間／天??圖２．每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集的緩釋液濃度，結(jié)果表示為Ｘ±Ｓ，ｎ＝３。??４．?ＡＬＰ活性檢測(cè)??為了檢測(cè)所包載的ｒｈＢＭＰ－２是否還具有成骨誘導(dǎo)活性，本實(shí)驗(yàn)將ｒｈＢＭＰ－２的??緩釋液與ｈＭＳＣｓ細(xì)胞共培養(yǎng)７天，結(jié)果表明緩釋?zhuān)程炫c緩釋?zhuān)诽焖占木忈屢??均能夠促進(jìn)ｈＭＳＣｓ細(xì)胞堿性碟酸酶活性的増高（分別為０．?５０４?＋?０．?０６日和０．?６８４??±?０．０６０?Ｕ?ｍｏｌ?ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ?），與對(duì)照組（０．?１３５?±?０．０１１?ｙ?ｍｏｌ??ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ）相比有盈著性差異（八０．０５）。并且緩釋?zhuān)诽旖M謗導(dǎo)細(xì)胞??表達(dá)的ＡＬＰ活性較緩釋?zhuān)程旖M高（代０．?０５）。??討論??人骨形態(tài)形成蛋白屬于轉(zhuǎn)化成生長(zhǎng)因子－目（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ??ｇ

本研究Ｗ膠原為媒介，將香草酸交聯(lián)的ｒｈＢＭＰ－２殼聚糖微球粘附于多孔??矮基磯灰石支架的表面，使所制各的ＨＣＣ支架能夠逐漸的緩釋?zhuān)颍瑁拢停校泊??進(jìn)骨組織長(zhǎng)入ＨＡ支架內(nèi)部，模式圖如圖１所示。??２．２．１?膠原徐層?ＨＡ?支架的蒂！Ｊ備（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｓｃａｆｆｏｌｄ，?ＨＣ）??將Ｉ型牛膠原溶解于己酸（化０５Ｍ）溶液中，待膠原充分洛解后，用氨氧??化鋼溶液將ＰＨ調(diào)節(jié)至中性，用ＭＥＳ緩沖液將膠原溶液濃度調(diào)節(jié)為Ｏ．ｌｇ／ｍｌ，??將高溫蒸汽滅菌的ＨＡ支架浸入膠原溶解中浸泡化。將溶解于ＭＥＳ水中的??ＥＤＣ和ＮＨＳ加入上述膠原溶液中使最終濃度為２．５?ｍｇ／ｍｌ?ＥＤＣ和０．６３?ｍｇ／ｍｌ??ＮＨＳ對(duì)膠原進(jìn)行交聯(lián)［１氣然后將吸附有膠原溶液的支架取出，在室溫下真空??干燥２４小時(shí)，然后用ＰＢＳ水輕柔的沖洗支架２次，在室溫下真空干燥２４小??時(shí)后，于－２０°低溫冷凍保存，Ｗ上均在無(wú)菌的條件下進(jìn)行。??２．２．２?膠原／ｒｈＢＭＰ－２?殼聚糖微球支架的制備（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ／ＲｈＢＭＰ－２?ｃｈｉｔｏｓａｎ??ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｓｃａｆｆｏｌｄ?，?ＨＣＣ）??本實(shí)驗(yàn)用滴加的方法將微球與膠原／ＨＡ支架復(fù)合


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