由于創(chuàng)傷、腫瘤及退行性變等各種原因?qū)е碌年P(guān)節(jié)軟骨損傷在臨床上常見(jiàn),然而由于軟骨細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞,軟骨本身缺乏血管營(yíng)養(yǎng)等原因?qū)е萝浌墙M織很難自身修復(fù),從而容易導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙乃至骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生；目前臨床上修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷常用的方法如關(guān)節(jié)腔清理術(shù)、關(guān)節(jié)磨削成形術(shù)、軟骨下骨鉆孔術(shù)及微骨折術(shù)等均存在一定不足,而白體或異體軟骨細(xì)胞移植也存在來(lái)源受限及不同程度免疫排斥等問(wèn)題；比較而言,軟骨組織工程無(wú)疑是最有發(fā)展前景的前沿技術(shù)。本課題通過(guò)研究人臍帶沃頓膠組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及擴(kuò)增探討新型組織工程種子細(xì)胞來(lái)源；并對(duì)骨髓及臍帶來(lái)源干細(xì)胞的成軟骨定向誘導(dǎo)分化能力進(jìn)行比較研究,從而優(yōu)化選擇軟骨組織工程種子細(xì)胞。制備新型殼聚糖/P（LLA-CL）軟骨組織工程多孔支架,根據(jù)組織工程的基本原理體外構(gòu)建組織工程軟骨,以期為軟骨組織工程的深入研究和發(fā)展提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第一章人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究目的研究人臍帶沃頓膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)并對(duì)其進(jìn)行鑒定,對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究,為組織工程種子細(xì)胞研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法無(wú)菌獲取胎兒臍帶沃頓膠組織,采用混合酶消化... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡(jiǎn)表
前言
第一章 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 主要試劑與儀器
        1.1.2 方法與步驟
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特征
        1.2.2 細(xì)胞周期檢測(cè)
        1.2.3 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原
        1.2.4 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線
        1.2.5 臍帶干細(xì)胞分化潛能檢測(cè)
    1.3 討論
    1.4 結(jié)論
第二章 人臍帶與骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨特性比較
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要試劑與儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)后形態(tài)變化
        2.2.2 定向誘導(dǎo)成軟骨后甲苯胺藍(lán)染色
        2.2.3 Ⅱ型膠原蛋白免疫組化染色
        2.2.4 RT-PCR檢測(cè)成軟骨特異性基因表達(dá)
    2.3 討論
    2.4 結(jié)論
第三章 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架的制備及生物相容性研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        3.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架材料形態(tài)觀察
        3.2.2 理化性能檢測(cè)結(jié)果
        3.2.3 細(xì)胞復(fù)合支架材料觀察
        3.2.4 細(xì)胞-支架復(fù)合培養(yǎng)電鏡掃描結(jié)果
        3.2.5 MTT檢測(cè)支架對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.2.6 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架細(xì)胞黏附率測(cè)定
        3.2.7 動(dòng)物植入實(shí)驗(yàn)
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第四章 HUMSCS復(fù)合殼聚糖/P（LLA-CL）多孔支架體外構(gòu)建組織工程軟骨
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要試劑與儀器
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        4.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 細(xì)胞-材料復(fù)合體形態(tài)觀察
        4.2.2 組織化學(xué)及免疫組化染色
        4.2.3 RT-PCR檢測(cè)Sox-9、Co12a1及aggrecan mRNA表達(dá)
        4.2.4 Western-blot檢測(cè)前CoL2a1及aggrecan蛋白表達(dá)
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]人臍帶Wharton’s jelly源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)中堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的作用[J]. 巴云濤,關(guān)方霞,胡祥,楊波,杜英,張?zhí)煜?田毅,喬曉俊,王成春,谷晨熙,雷寧?kù)o,王曉薇.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(19)
[3]細(xì)胞因子表達(dá)譜在人臍帶Wharton膠間質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成軟骨細(xì)胞的變化[J]. 侯克東,郭全義,張莉,袁玫,眭翔,汪愛(ài)媛,許文靜,劉舒云,盧世璧.  中國(guó)矯形外科雜志. 2009(21)
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本文編號(hào)：3053899