發(fā)布時間：2020-12-07 17:11

　　目的:通過將兔骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)、兔骨髓間充干細胞誘導分化形成的成骨細胞(osteoblast cells,OBs)和人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)體外共培養(yǎng),用低粘附培養(yǎng)法構建預血管化三維細胞微球,為血管化組織工程骨的構建提供一種新的策略。方法:(1)兔骨髓間充質干細胞的體外分離和培養(yǎng):采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、增殖情況,拍照記錄。(2)兔骨髓間充質干細胞向成骨細胞方向的誘導分化:將第2代的兔骨髓間充質干細胞用含成骨誘導劑的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)14天,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、增殖狀況,茜素紅染色鑒定成骨細胞。(3)人臍靜脈內皮細胞的培養(yǎng):觀察細胞形態(tài)、增殖情況,拍照記錄。(4)BMSCs細胞微球的構建:細胞懸液以1000個/孔、5000個/孔、10000個/孔、50000個/孔的接種密度接種在超低粘附96孔U型培養(yǎng)板中構建BMSCs微球,接種后的第1,3,7天在顯微鏡下觀察并測量微球直徑大小... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs形態(tài)學觀察:（A）P0BMSCs貼壁細胞呈長梭形，多角形，少量呈不規(guī)則形

BMSCs細胞懸液最初接種于超低粘附96孔板時，細胞散在分布，隨著時間的推移，細胞自發(fā)聚集，24h內細胞微球形成。形成細胞微球的直徑大小與細胞數量有關（圖2）。當BMSCs接種密度為1000個/孔時，細胞微球的直徑為197.7±2.1μm；當BMSCs接種密度為5000個/孔時，細胞微球直徑為338.8±3.3μm；當BMSCs接種密度為10000個/孔時，細胞微球直徑為418.1±4.3μm；當BMSCs接種密度為50000個/孔時，細胞微球直徑為

11765.7±2.8μm。細胞微球的大小與細胞接種數量有關，細胞接種數量越大，形成的細胞微球直徑越大（圖3）。圖 2 不同細胞數量的 BMSCs 接種于超低粘附培養(yǎng)板后 24h 形成的微球 (A)細胞數量為1000 個/孔 (B)細胞數量為 5000 個/孔 (C)細胞數量為 10000 個/孔 (D)細胞數量為 50000 個/孔(Scale bars=100μm)圖 3 不同細胞數量的 BMSCs 接種于超低粘附培養(yǎng)板 24h 形成微球的大小將以1000個/孔、5000個/孔、10000個/孔、50000個/孔的細胞接種數量形成的BMSCs微球繼續(xù)培養(yǎng)，在細胞接種后的第1，3，7天測量各組微球的大小，對數據進行統計學分析。結果表明各組細胞微球的直徑均隨著時間的推移在第1，3，7天逐漸減小，P<0.05表示結果具有統計學意義(圖4)。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2903611