【摘要】：水凝膠是一種高含水量的三維網(wǎng)狀聚合物,在許多領域中被廣泛研究。水凝膠含水量高、粘彈性好,可塑性強等特性使水凝膠在生物醫(yī)學應用被廣泛研究。而制備水凝膠材料的選擇,直接決定其能否作為一種理想的生物醫(yī)學材料。本文通過研究殼聚糖溫敏水凝膠中β-GP和NaHCO3用量對該體系成膠時間、形態(tài)等性能的影響,對水凝膠交聯(lián)條件進行優(yōu)化。然后,通過調控EDC/NHS的用量和接枝時間,研究重組人源膠原與殼聚糖接枝的最優(yōu)條件。以所得交聯(lián)和接枝的最優(yōu)條件為基礎,改變重組人源膠原和殼聚糖的比例,最終得出重組人源膠原/殼聚糖溫敏水凝膠體系的最優(yōu)方案,通過SEM、機械性能測試、細胞毒性與包埋實驗等,評價了該體系的理化性能和生物相容性。(1)將NaHCO3作為交聯(lián)劑加入體系。研究結果表明,β-GP和NaHCO3均能提高水凝膠成膠速率,同時增加水凝膠機械強度,具有協(xié)同作用。NaHCO3的加入可以有效降低β-GP用量,改善高濃度β-GP的潛在細胞毒性。細胞毒性實驗表明NaHC03對細胞活性無影響。最終得到200μl/ml,50%β-GP/0.6MNaHC03的最佳用量;(2)利用EDC/NHS接枝體系,構建重組人源膠原與殼聚糖間酰胺鍵連接,進行接枝。結果顯示,重組人源膠原與殼聚糖在溶液中成功接枝,EDC用量對成膠時間影響不大,接枝時間過短水凝膠會產(chǎn)生RHC溶出現(xiàn)象。16mMEDC、80mMNHS,接枝4h時,水凝膠的壓縮模量最佳。(3)改變重組人源膠原和殼聚糖比例,最終確定凝膠制備方案。體系中重組人源膠原含量增加,伴隨絲網(wǎng)狀結構變多,凝膠中孔隙直徑增大,凝膠中細胞增殖生長狀態(tài)隨之提高。綜合凝膠機械性能進行評估,殼聚糖與重組人源膠原比例為3:1為最佳比例。
【學位授予單位】：南京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R318.08
【圖文】：

ｍ型重組人源膠原蛋白是以人ｍ型膠原蛋白為模板，利用巴氏畢赤酵母作為表達宿逡逑主，穿梭質粒ＰＰＩＣ９Ｋ為表達載體，構建了同向六串聯(lián)類人膠原蛋白表達載體ｐＰＩＣ９ＫＧ６逡逑（圖１．１），通過電轉化將其轉入畢赤酵母中，誘導其表達的ｍ型重組人源膠原蛋白逡逑基因測序結果見圖１．２。重組人源膠原蛋白為本論文所用制備水凝膠的主要原料。逡逑ｒ邋％－邐Ｌ逡逑／邐ＰＰＪＣ９Ｋ邐ｋ逡逑＊邋４邐Ｋ？�。耍颠姡蛇娺娺娺婂�？郵逡逑…＼邐／邋：⑶邐ｆ邋叫似似邐Ｉ逡逑ｆ逡逑－）邋一逡逑圖１．１六串聯(lián)類人膠原蛋白基因表達載體ＰＰＩＣ９ＫＧ６的構建逡逑＾邐９０邐１００邐ＩｌＯ邐１２０邐１３０邐１４０邐１５０邐１６０邐１逡逑二邋ＧＡ邋ｉＴＴＡＡＴＴ邋Ｃ邋ＧＣ邋ＧＧＣ邋Ｃ邋ＧＣ邋ＴＴＡＡＣ邋ＧＣＣＧＧＣＴＧＧ邋瓦邋ＣＴＴ邋ＧＧ邋ＴＴＡＣ邋ＣＴ邋ＧＧ邋Ｃ邋ＴＴＡＣ邋Ｃ邋ＴＴ邋ＧＣ１邋ＣＴ邋Ｃ邋ＣＡ＆邋（？邋丁丁邋ＧＡＣ邋Ｃ邋ＴＧ邋＆ＧＴＴＡＣ邋ＣＴ邋Ｇ邋ＧＴＴ邋ＧＡＣ邋Ｃ邋ＴＧ邋Ｇ邋ＡＧ邋ＡＡＣ邋ＣＴＴ邋Ｇ

邐重組人源膠原溫敏水凝膠的制備及性能研究逡逑重組人源膠原蛋白與Ｓｉｇｍａ公司的標準ＩＩＩ型膠原蛋白表征，如圖１．３所示。圖１．４Ａ逡逑電泳結果顯示，重組人源膠原蛋白的分子量為１１２邋ｋＤａ；圖Ｌ４Ｂ高效液相色譜圖顯示，逡逑重組人源膠原蛋白純度達９９．６８％。圖１．４Ｃ、Ｄ為重組人源膠原蛋白的氫譜和碳譜［６７］。逡逑Ａｂｓ邐Ｏｖｅｄａｙ邋－邋Ｓｒａａ逡逑Ａ邐—邋邐：邐：邐邐邐￣￣－￣Ｚ邋￣邋邐逡逑＾刪逡逑＿邋ｊｆ邋？邐邐邋：邐—邐：邋＿＿邐＼邋＿

【參考文獻】

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本文編號：2732830