【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本實(shí)驗(yàn)選取與支架性能相關(guān)性較高且尚未進(jìn)行系統(tǒng)性檢測(cè)的脫細(xì)胞參數(shù),通過(guò)對(duì)比不同的軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)制備方案,探索不同參數(shù)(如脫細(xì)胞試劑、軟骨微粒直徑、交聯(lián)方法,等)對(duì)支架性能的影響,從而構(gòu)建性能優(yōu)化的軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)支架,為改進(jìn)今后的組織工程軟骨的構(gòu)建方法提供新的線索。實(shí)驗(yàn)方法:將0~100μm與0~300μm的軟骨微粒分別用0.5%SDS、1%SDS、1%TritonX-100試劑進(jìn)行脫細(xì)胞處理,凍干后分別進(jìn)行脫水熱處理交聯(lián)和京尼平交聯(lián),構(gòu)建出采用不同參數(shù)制備的脫細(xì)胞支架。然后,針對(duì)構(gòu)建的脫細(xì)胞支架,進(jìn)行生化分析以及物理性能的檢測(cè):Picogreen DNA定量分析支架核酸含量從而評(píng)價(jià)脫細(xì)胞效果;DMMB法定量檢測(cè)支架的糖胺聚糖水平;OHP法定量檢測(cè)總膠原含量;通過(guò)分析壓縮模量,評(píng)價(jià)樣品的力學(xué)性能;通過(guò)micro-CT掃描,評(píng)價(jià)樣品孔隙率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:軟骨基質(zhì)微粒凍干成型后,能夠獲得具有三維形態(tài)和多孔微觀結(jié)構(gòu)的支架,其孔隙豐富且互相連通。支架具有一定的彈性,壓縮后可回彈,能夠呈現(xiàn)出與海綿相似的特征。軟骨微粒經(jīng)脫細(xì)胞處理后,直徑100μm的軟骨微粒材料能夠獲得滿意的DNA剩余含量。其中0.5%SDS、1%SDS、1%TritonX-100組均使DNA含量減少90%,脫細(xì)胞效果良好,且組間無(wú)顯著性差異(P0.05)。延長(zhǎng)脫細(xì)胞試劑的處理時(shí)間,具有在一定程度上減少支架DNA含量的趨勢(shì),在直徑較大的軟骨微粒中,這種趨勢(shì)較為明顯,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。0.5%SDS、1%SDS、1%TritonX-100對(duì)蛋白多糖的減少作用有較為明顯的差異。相比其他兩組,1%TritonX-100仍能夠維持相對(duì)較高的糖胺聚糖(GAG)水平,并明顯高于1%SDS和0.5%SDS。另外,GAG的剩余含量也與軟骨微粒的直徑有關(guān),直徑較大的軟骨微粒能夠保留更多的GAG成分。延長(zhǎng)處理時(shí)間有減少GAG含量的趨勢(shì),而脫細(xì)胞處理對(duì)支架中膠原的含量影響不大。脫水熱處理法交聯(lián)的支架,相較于京尼平法交聯(lián),具有更良好的抗壓性能。100μm的軟骨微粒構(gòu)成的脫細(xì)胞基質(zhì)支架具有更高的楊氏模量,其中不同的脫細(xì)胞試劑產(chǎn)生的影響不明顯;而微粒直徑300μm的支架抗壓性能較差,且脫細(xì)胞試劑的類型對(duì)力學(xué)性能的影響更明顯,其中1%SDS組的楊氏模量最低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1%TritonX-100具有能夠維持更高抗壓性能的趨勢(shì),但差異不明顯。交聯(lián)后支架具有較大的孔隙率,軟骨微粒直徑對(duì)孔隙率有較明顯的影響,100μm組的孔隙率高于300μm。100μm組中,經(jīng)過(guò)1%TritonX-100處理的支架孔隙率較高,300μm組中不同脫細(xì)胞試劑對(duì)孔隙率的影響不顯著。另外,相比于京尼平交聯(lián),脫水熱處理法所獲得的支架具有維持較大的孔隙率的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:TritonX-100作為一種較溫和的脫細(xì)胞試劑,不僅能夠獲得滿意的DNA清除率,還能保存相對(duì)較高的GAG水平。100μm的軟骨微粒構(gòu)成的支架,相較于300μm組,在孔隙率和機(jī)械性能方面能夠呈現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)。脫水熱處理能夠獲得良好的機(jī)械性能,獲得的支架的抗壓強(qiáng)度優(yōu)于京尼平法。
【圖文】：

2.3.7孔隙率
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R783.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊強(qiáng);彭江;盧世璧;孫明學(xué);黃靖香;張莉;許文靜;趙斌;眭祥;姚軍;袁玫;;新型脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)三維多孔支架的制備[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2008年03期

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本文編號(hào)：2706266