發(fā)布時間：2020-04-20 23:26

【摘要】：目的:混合層中牙本質(zhì)膠原的降解是導(dǎo)致樹脂-牙本質(zhì)粘接界面破壞的主要原因。保護(hù)混合層中裸露的膠原纖維,是提高牙本質(zhì)粘接界面穩(wěn)定性的有效途徑。有研究結(jié)果顯示柑橘黃烷酮類物質(zhì)能夠抑制膠原降解、保持膠原穩(wěn)定,提示其應(yīng)用于穩(wěn)定牙本質(zhì)粘接界面的可行性。柑橘黃烷酮種類多樣,研究柑橘黃烷酮在穩(wěn)定膠原纖維方面的構(gòu)效關(guān)系,分析甲基化、糖苷化對其膠原穩(wěn)定作用的影響,尋找最優(yōu)物質(zhì)用以提高牙本質(zhì)粘接耐久性。本研究的內(nèi)容包括檢測三種柑橘黃烷酮桔皮素(Hst)、桔皮苷(Hsd)、柚皮素(Nge)對游離型和結(jié)合型膠原酶活性的影響,分析其抑制膠原酶活性的功能基團(tuán);柑橘黃烷酮處理完全脫礦的牙本質(zhì)膠原,觀察膠原生物及理化性能的變化,分析柑橘黃烷酮對牙本質(zhì)膠原結(jié)構(gòu)的影響,探索其保護(hù)膠原的機(jī)制,為臨床改善牙本質(zhì)粘接的長期穩(wěn)定性開辟新的思路。方法:1.熒光定量法檢測三種物質(zhì)Hst、Hsd、Nge對游離型膠原酶活性的影響,分析甲基化、糖苷化等結(jié)構(gòu)對其酶抑制效能的影響,尋找其抑制酶活性的功能基團(tuán)和可能機(jī)制。2.柑橘黃烷酮處理脫礦的牙本質(zhì)膠原,老化15天后檢測膠原纖維的干重質(zhì)量變化、羥脯氨酸(HYP)釋放量;透射電鏡(TEM)觀察膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;原位明膠酶實驗進(jìn)一步評價柑橘黃烷酮對牙本質(zhì)基質(zhì)中結(jié)合型MMPs活性的影響。3.500μg/m L的Hst、Hsd、Nge處理完全脫礦的牙本質(zhì)膠原60 min后檢測膠原的彈性模量、吸水率、膠原酶降解后HYP的釋放量,分析柑橘黃烷酮對牙本質(zhì)膠原的機(jī)械性能和耐酶解性能的影響;衰減全反射-傅里葉紅外光譜(ATR-FTIR)檢測柑橘黃烷酮處理前后牙本質(zhì)膠原的結(jié)構(gòu)變化;柑橘黃烷酮處理脫礦的牙本質(zhì)表面,吹干后在掃描電鏡下觀察膠原纖維網(wǎng)的形態(tài)。結(jié)果:1.三種柑橘黃烷酮Hst、Hsd、Nge均能抑制游離型膠原酶的活性。抑制作用隨著濃度升高而增強(qiáng),當(dāng)濃度達(dá)到500μg/m L時抑制比例達(dá)到90%以上,三者的抑制程度無統(tǒng)計學(xué)差異。2.與對照組相比,老化15天后,柑橘黃烷酮處理組的牙本質(zhì)膠原干重缺失比例、HYP釋放量減少,膠原纖維結(jié)構(gòu)更完整;激光共聚焦檢測柑橘黃烷酮處理組的熒光釋放強(qiáng)度降低,這些結(jié)果顯示Hst、Hsd、Nge對結(jié)合型MMPs具有抑制作用。三者的抑制程度無統(tǒng)計學(xué)差異。3.脫礦的牙本質(zhì)膠原經(jīng)過Hst、Hsd、Nge處理后,牙本質(zhì)膠原的彈性模量增強(qiáng)、吸水率降低,膠原酶浸泡后HYP釋放量降低,各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;ATR-FTIR結(jié)果顯示,三種物質(zhì)處理后,牙本質(zhì)膠原的三維結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯變化;掃描電鏡結(jié)果顯示,脫礦的牙本質(zhì)表面經(jīng)過柑橘黃烷酮處理并吹干后,暴露的牙本質(zhì)膠原仍能保持原有的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。實驗結(jié)果表明柑橘黃烷酮能夠通過對牙本質(zhì)膠原的生物改性增強(qiáng)膠原自身的抗酶解性能,達(dá)到穩(wěn)定膠原的目的。綜上所述,柑橘黃烷酮能夠抑制MMPs活性并且可以對牙本質(zhì)膠原進(jìn)行生物改性,保護(hù)膠原不被酶降解,提示柑橘黃烷酮具有改善牙本質(zhì)粘接耐久性的潛力。
【圖文】：

酮物質(zhì)是一類重要的活性物質(zhì)，柑橘屬植物中有多種類黃酮物質(zhì)在柑橘屬中含量最為豐富，廣泛存在于橙子、檸檬、柚子等子、果實、花以及皮中。他們以苷元或者糖苷的形式存在于各比較常見的苷元形式有桔皮素（Hesperitin）和柚皮素（Naringen式為桔皮苷（Hesperidin）。表明它們具有較多的生理功能。首先它們能夠清除氧自由基，且隨著黃酮上的酚羥基數(shù)目的增加，其抗氧化能力也顯著增強(qiáng)多的酚羥基，所以其抗氧化能力強(qiáng)于單酚，而糖苷化在一定黃定程度的下降[90]；桔皮苷能夠減少水腫的發(fā)生、緩解炎癥，具；桔皮素能夠抑制甘油三酯的增加，控制血漿中膽固醇和甘油三能夠在較低濃度下通過引發(fā)細(xì)胞凋亡抑制癌細(xì)胞的增長[92]；桔黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、陰溝腸桿菌、傷寒沙門桿菌等制效果[93]。

計分析使用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，，Levene 方差齊性檢驗后，采用單因One -way ANOVA）比較各處理組膠原酶活性的總體差異，Tukey 檢驗進(jìn)行，檢驗標(biāo)準(zhǔn) α = 0.05。驗結(jié)果桔皮素對游離型膠原酶的作用Hst 對膠原酶活性的抑制百分比結(jié)果如圖 1.1。1-10-P 對膠原酶活性的抑制80.19 ±2.45%。隨著濃度升高，Hst 對酶活性的抑制比例增大。125 μg/mL、L 的 Hst 對膠原酶的抑制百分比分別為 5.90 ±2.47%、35.62 ±4.55%；當(dāng)濃 μg/mL 時，抑制比例達(dá)到 91.78 ±1.90%。各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R783.1

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本文編號：2635079