【摘要】：目的：探討瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸在皮膚再生修復(fù)中的作用。 方法：用環(huán)氧氯丙烷活化瓊脂糖，加入5kDa的透明質(zhì)酸反應(yīng)，透析純化-冷凍干燥法制備得到瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸共聚物；采用粘度法測(cè)定瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸的分子量；通過紅外光譜法、元素分析法、核磁共振法對(duì)材料進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征；利用MTT法檢測(cè)瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸共聚物對(duì)成纖維細(xì)胞（3T3）的細(xì)胞毒性。對(duì)瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸膜進(jìn)行細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)材料的生物相容性；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)材料分別作用于3T3細(xì)胞和巨噬細(xì)胞(RAW264.7)后，對(duì)3T3細(xì)胞中Ⅰ型及Ⅲ型膠原和對(duì)RAW264.7細(xì)胞中TNF-αmRNA表達(dá)水平的影響；并進(jìn)一步通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blotting）實(shí)驗(yàn)表明材料作用于3T3細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞內(nèi)分泌Ⅰ型膠原蛋白以及Ⅲ型膠原蛋白的影響。小鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)，表征材料在小鼠皮膚傷口修復(fù)中的作用，并通過對(duì)修復(fù)部位的皮膚組織進(jìn)行石蠟切片和HE染色分析小鼠皮膚傷口修復(fù)情況。 結(jié)果：紅外光譜、元素分析以及核磁共振的分析結(jié)果表明成功制備出了瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸共聚物。粘度法測(cè)得的瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸聚合物的分子量約為100kDa左右。MTT法的結(jié)果表明，瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸聚合物在2mg/mL濃度范圍內(nèi)，72h時(shí)間范圍內(nèi)，無細(xì)胞毒性。細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸材料涂膜的玻片接種3T3細(xì)胞24h后，細(xì)胞能夠很好地粘附到涂膜玻片上，細(xì)胞狀態(tài)良好，表明材料能夠和3T3細(xì)胞發(fā)生相互作用，進(jìn)而粘附細(xì)胞。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，材料與3T3細(xì)胞作用后，3T3細(xì)胞中Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的mRNA水平顯著上調(diào)，并且Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原mRNA水平的上調(diào)都隨著瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸材料溶度的增加而遞增。Western Blotting實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)材料與3T3細(xì)胞作用后，細(xì)胞中Ⅰ型膠原蛋白以及Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)，并且Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平的上調(diào)都隨著瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸材料溶度的增加而遞增，這一結(jié)果與之前的Real-time PCR的結(jié)果相一致。小鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸材料可以減少傷口炎癥反應(yīng)和瘢痕形成，促進(jìn)血管生成，，加速小鼠皮膚傷口愈合。最后修復(fù)部位的皮膚組織的石蠟切片和HE染色結(jié)果表明，瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸材料組傷口復(fù)原情況好，皮膚創(chuàng)傷經(jīng)修復(fù)后的組織與正常組織類似。 結(jié)論：瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸共聚物不僅能夠與3T3細(xì)胞相互作用，促進(jìn)細(xì)胞粘附，還能夠提高3T3細(xì)胞中Ⅰ型膠原以及Ⅲ型膠原的蛋白表達(dá)水平，可以有效促進(jìn)皮膚修復(fù)再生。
【圖文】：

皮膚的創(chuàng)面愈合是一個(gè)復(fù)雜卻有序的生物過程，在每個(gè)時(shí)期都有許多組織外基質(zhì)、細(xì)胞因子等參與，涉及一系列的生物學(xué)過程，如出血、血管反應(yīng)反應(yīng)、肉芽組織形成、再上皮化及修復(fù)后的重塑等[18]，如圖 1.1 所示。

Agarose-g-HA 的圖譜 b 中可以明顯看到出現(xiàn)了兩個(gè)新的特 1739cm-1 以及 1644-1 附近分別是透明質(zhì)酸上的羧基峰和酰胺帶Ⅲ動(dòng)吸收峰[76]，這表明 Agarose-g-HA 接枝共聚物上有透明質(zhì)酸的特一步可以說明 Agarose-g-HA 接枝反應(yīng)是有效的。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李曉光;方勇;姚敏;胡孝輝;徐鵬;俞為榮;倪濤;;單核巨噬細(xì)胞集落刺激因子對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成的影響[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2010年08期

2 沈彬,段宏,陳堅(jiān),楊靜,裴福興;bFGF緩釋微球的制備及其促雪旺細(xì)胞分裂增殖的初步研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年04期

3 姚康德,王向輝,侯信;組織工程相關(guān)生物材料[J];天津理工學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

4 唐世杰;朱鎮(zhèn)森;胡素鑾;謝思田;姚建;;TGF-β3基因轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞促進(jìn)大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2010年01期

5 焦國(guó)豪;;組織工程支架材料研究進(jìn)展[J];化工中間體;2007年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 魏民;巨噬細(xì)胞損傷和淋巴管形成障礙導(dǎo)致的糖尿病足部非缺血性潰瘍難愈合的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

2 黃建艷;瓊脂糖接枝透明質(zhì)酸共聚物作為多肽載體的研究[D];暨南大學(xué);2009年

3 陳強(qiáng);類固醇激素受體輔激活子3（SRC-3）在小鼠腹膜炎中的作用及抗炎藥物的篩選[D];廈門大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 包磊;大型海藻多糖的改性及其作為皮膚再生材料的研究[D];暨南大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2582854