【摘要】：因外傷、良性疾病或者惡性疾病造成長段氣管損傷，必須行氣管移植重建，才可恢復呼吸道的通暢。氣管移植是長段氣管修復的重要手段，是目前研究的熱點。人工氣管和同種異體氣管是氣管移植的主要替代物，但是二者都有自身的缺點，不是臨床應用的理想氣管替代物。近年來，組織工程同種異體氣管越來越受到人們的關注，但組織工程同種異體氣管移植體的免疫排斥、再細胞化和再血管化是制約組織工程氣管發(fā)展的重要因素。其原因是同種異體氣管替代物沒有去除含有強抗原性的氣管粘膜上皮細胞，和保留無免疫原性的氣管軟骨和細胞外基質(zhì)。因此需要尋找新方法達到降低氣管移植的免疫原性，保留細胞外基質(zhì)以促進氣管支架再血管化和再細胞化。深低溫冷凍法和單純酶洗法是制備同種異體氣管支架的兩種常用方法，但是實驗結果和臨床應用效果并不理想。本實驗通過將深低溫冷凍法和單純酶洗法相結合的方法探討既能去除同種異體氣管支架氣管粘膜細胞的抗原性，又能夠保留較多的細胞外基質(zhì)和生物力學性能，促進移植氣管支架的再血管化和再細胞化，為組織工程同種異體氣管移植的臨床應用提供依據(jù)。 目的 應用單純酶洗法探討制備兔氣管支架的合適周期，并進一步探討深低溫冷凍-酶洗法制備兔同種異體氣管支架在降低氣管免疫原性，保留生物力學性能和再細胞化、再血管化所需細胞外基質(zhì)的作用，評價深低溫冷凍-酶洗法制備氣管支架同種異體異位移植再血管化的效果，為組織工程同種異體氣管移植研究提供實驗依據(jù)。 方法 1、采用不同周期的單純酶洗法處理兔氣管支架，行組織學、超微結構以及生物力學性能的檢測，探討單純酶洗法處理兔氣管支架的最適周期。 2、用深低溫冷凍-酶洗法制備兔氣管支架，并與單純酶洗法處理3個周期和深低溫冷凍法制備的氣管支架進行組織學、超微結構以及生物力學性能的檢測的結果比較。 3、將深低溫冷凍-酶洗法制備的兔氣管支架進行體內(nèi)同種異體大網(wǎng)膜包裹，觀察移植體氣管新的微血管生成的情況。 結果 1、經(jīng)單純酶洗法3個周期與2、4個周期制備地兔氣管支架相比，在維持生物力學性能的前提下，可以較完整的去除氣管粘膜上皮細胞，且較完整的保留了細胞外基質(zhì)的完整性。深低溫冷凍-酶洗法與單純酶洗法處理3個周期、深低溫冷凍法制備的氣管支架，在制備的氣管支架在最大拉伸力、破裂力、變異率等生物力學方面，無統(tǒng)計學差異，即都較好保留生物力學性能。 2、深低溫冷凍-酶洗法與單純酶洗法處理3個周期制備的氣管支架相比，都可以完整的去除氣管粘膜上皮細胞，但保留了更多的細胞外基質(zhì)；深低溫冷凍-酶洗法與深低溫冷凍法制備的氣管支架相比，都可以保留較多的細胞外基質(zhì)，但具有更好的去免疫原效果。 3、經(jīng)深低溫冷凍-酶洗法制備的兔氣管支架行同種異體大網(wǎng)膜包裹4周后，氣管支架的細胞外基質(zhì)可見新生的微血管和再生的血管內(nèi)皮細胞。 結論 1、通過單純酶洗法制備的兔氣管支架，經(jīng)過3個周期與2、4個周期制備的氣管支架相比，在完全去除氣管粘膜上皮細胞的同時，保留了較多的細胞外基質(zhì)，是較為理想的制備兔同種異體氣管支架的方法。 2、經(jīng)過深低溫冷凍-酶洗法與單純酶洗法、深低溫冷凍法制備的氣管支架相比，既能夠維持氣管的生物力學性能，又具有理想的去抗原效果，還保留了較多的細胞外基質(zhì)。因此，深低溫冷凍-酶洗法是制備兔組織工程同種異體氣管支架更為理想的方法。 3、將深低溫冷凍-酶洗法制備的氣管支架行體內(nèi)同種異體大網(wǎng)膜包裹，可見再生的血管內(nèi)皮細胞和新生的微血管。證明經(jīng)過深低溫冷凍-酶洗法制備的兔氣管支架，是一種可靠的制備組織工程兔同種異體支架的方法。
【圖文】：

實驗組 D 5.10±0.61 2.855±0.30* 0.350±0.042* 9.86±0.46 142±18**p<0.05 實驗 D 組與其余 3 組相比差異有統(tǒng)計學意義。圖1 單純酶洗法組織學觀A,對照組未處理氣管，粘膜見大量完整的上皮細胞；B,處理2個周期氣管，粘膜見部分完整的上皮細胞；C, 處理3個周期氣管，未見完整的氣管粘膜上皮細胞；D,處理4個周期氣管，未見完整的氣管粘膜上皮細胞（×400）

碩 士 學 位 論 文-23-圖2 掃描電鏡觀察處理E,3個周期的氣管支架，可見部分細胞外基質(zhì)（×5,000）;F,掃描電鏡觀察處理4個周期的氣管支架，未見細胞外基質(zhì)（×5，000）4 討論氣管粘膜層由上皮和固有層組成。氣管粘膜上皮包擴基細胞、纖毛細胞以及杯狀細胞。纖毛細胞可以清除呼吸道的分泌物，，保持呼吸道的通暢。杯狀細胞可分泌粘蛋白，混合腺可以分泌粘液，粘蛋白和粘液是呼吸道行使功能的重要成分，可以吸附氣管交換過程中有害氣管的顆粒，保持人體呼吸的空氣質(zhì)量。小顆粒細胞為內(nèi)分泌細胞，內(nèi)含 5-羥色胺等物質(zhì)
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08

【參考文獻】

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本文編號：2581890