【摘要】：透明質(zhì)酸（hyaluronan, HA）是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖雙糖重復(fù)單位組成的糖胺聚糖，，具有良好的生物相容性和非免疫原性，被廣泛用于眼科、骨科、耳科、普外科等醫(yī)療領(lǐng)域，現(xiàn)作為組織工程材料逐步被研究和應(yīng)用。天然的HA利用交聯(lián)劑制備衍生物凝膠來(lái)延長(zhǎng)其降解周期，制備成交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉（cross-linked sodium hyaluronan,CHA）凝膠以拓展其應(yīng)用，交聯(lián)劑化學(xué)活性使得其具有一定的毒性，使得CHA凝膠存在生物安全性的風(fēng)險(xiǎn)和隱患，亟需對(duì)生物安全性進(jìn)行研究。 本研究對(duì)利用聚乙二醇（PEG）作為交聯(lián)劑制備的PEG-CHA凝膠產(chǎn)品，依據(jù)ISO10993醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行其生物安全性評(píng)價(jià)研究，建立適用于PEG-CHA凝膠產(chǎn)品的生物安全性評(píng)價(jià)方法。利用對(duì)PEG-CHA凝膠產(chǎn)品小白鼠皮下植入后皮膚表面觀察方法來(lái)評(píng)價(jià)降解速度和皮膚局部炎性反應(yīng)，觀察凝膠植入后形成皮丘面積和高度來(lái)評(píng)價(jià)體內(nèi)降解速度，根據(jù)植入凝膠部位皮膚外觀的觀察情況來(lái)評(píng)價(jià)局部炎性反應(yīng)；根據(jù)植入PEG-CHA凝膠前后小白鼠采食量和體重增量的變化來(lái)評(píng)價(jià)凝膠植入對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)影響，觀察小白鼠局部、全身或行為反應(yīng)，來(lái)評(píng)價(jià)植入凝膠對(duì)其行為反應(yīng)影響；對(duì)植入凝膠部位皮膚解剖后觀察組織反應(yīng)的特性及程度，評(píng)價(jià)植入凝膠后皮膚局部炎性反應(yīng)，對(duì)解剖皮膚組織中未降解PEG-CHA凝膠利用咔唑顯色法測(cè)定其中透明質(zhì)酸含量，來(lái)評(píng)價(jià)PEG-CHA凝膠體內(nèi)降解速度；將植入PEG-CHA凝膠部位皮膚組織制作病理學(xué)切片，HE染色評(píng)價(jià)組織病理學(xué)反應(yīng)；測(cè)量植入PEG-CHA凝膠小白鼠血液中透明質(zhì)酸含量來(lái)評(píng)價(jià)PEG-CHA凝膠在小白鼠體內(nèi)降解速度。 通過(guò)上述建立的PEG-CHA凝膠生物安全性評(píng)價(jià)方法對(duì)利用PEG作為交聯(lián)劑，HA含量為1.5%，交聯(lián)度為5%制備的CHA凝膠進(jìn)行了生物安全性的評(píng)價(jià)研究。植入PEG-CHA凝膠小白鼠皮膚局部和病理學(xué)觀察未見(jiàn)炎性反應(yīng)，利用皮膚病理學(xué)切片中皮膚厚度和毛囊數(shù)量對(duì)各PEG-CHA凝膠植入周期皮膚進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析，結(jié)果顯示皮膚厚度由未植入組的約230μm增長(zhǎng)為約360μm，1mm2毛囊數(shù)由未植入組的約9個(gè)增長(zhǎng)為約32個(gè)；小白鼠行為和代謝監(jiān)測(cè)未見(jiàn)異常；利用測(cè)量解剖皮膚組織中未降解PEG-CHA凝膠含量的方法，測(cè)定的PEG-CHA凝膠降解周期為2個(gè)月，與未交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠（降解周期14天）相比，體內(nèi)抗降解性能明顯提高；血液中HA含量測(cè)定結(jié)果表明，PEG-CHA體內(nèi)降解周期結(jié)果亦為2個(gè)月，與解剖皮膚組織測(cè)定未降解PEG-CHA凝膠方法結(jié)果一致。 本研究建立的方法可用于對(duì)制備的PEG-CHA凝膠進(jìn)行生物安全性、體內(nèi)抗降解性等性能的評(píng)價(jià)。對(duì)皮膚厚度和毛囊數(shù)量的考察結(jié)果顯示，制備的PEG-CHA凝膠植入促進(jìn)了皮膚厚度和毛囊數(shù)量增加，該特性有待于更多的研究和應(yīng)用拓展；利用血液中HA含量變化來(lái)表征PEG-CHA凝膠體內(nèi)降解速度方法的建立對(duì)于評(píng)價(jià)PEG-CHA凝膠體內(nèi)降解具有創(chuàng)傷小、結(jié)果可信度高、操作便利、檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，且可用于其他交聯(lián)劑交聯(lián)修飾形成的CHA凝膠體內(nèi)降解速度評(píng)價(jià)，尚未見(jiàn)有類似方法報(bào)道。
【圖文】：

位皮膚解剖觀察結(jié)果部位皮膚觀察結(jié)果HA 凝膠和天然醫(yī)用 HA 凝膠的皮膚組織在各試驗(yàn)，利用低倍放大鏡對(duì)解剖的皮膚組織進(jìn)行組織反應(yīng)膠植入部位各試驗(yàn)周期解剖皮膚經(jīng)觀察未見(jiàn)組織炎隨植入時(shí)間延長(zhǎng)凝膠塊逐步減小，第 10 天時(shí)剩余 2），第 20 天時(shí)剩余凝膠約占總植入凝膠體積的 2入凝膠體積的 1/3 左右，第 60 天時(shí)剩余凝膠未能植入部位各試驗(yàn)周期解剖皮膚經(jīng)觀察未見(jiàn)組織炎性膠塊大小隨植入時(shí)間的延長(zhǎng)而減小，第 3 天時(shí)剩余 3），第 7 天時(shí)剩余凝膠約占總植入凝膠體積的 1凝膠的 1/5 左右，第 15 天時(shí)剩余凝膠未能明顯看

圖 3 天然 HA 凝膠植入第 3 天解剖照片透明質(zhì)酸鈉凝膠含量檢測(cè)結(jié)果醛酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度溶液吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。（見(jiàn)圖 4）如下。表 14 葡萄糖醛酸各濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值0 30 40 50 60 .000 0.271 0.363 0.459 0.548
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2555681