【摘要】：研究背景目前在燒傷創(chuàng)面的治療中,越來越多的皮膚組織工程材料獲得了應(yīng)用,其中真皮替代物的開發(fā)亦成為皮膚組織工程的研究熱點(diǎn)。但是現(xiàn)行推廣的人工真皮應(yīng)用受限往往是因為其支架材料血管化較慢、生物相容性不佳、抗感染能力差、價格昂貴,同時對于如何模擬天然體細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)依然是皮膚組織工程結(jié)構(gòu)設(shè)計中的難點(diǎn)。因此更好的支架結(jié)構(gòu)設(shè)計方案和選用適合的生物材料是開發(fā)新型人工真皮替代物、模擬細(xì)胞外基質(zhì)的兩個關(guān)鍵。目前靜電紡絲技術(shù)制備的納米纖維支架具有高比表面積、高孔隙率和相互連通的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),相對于傳統(tǒng)技術(shù)制備的材料能更好地模擬天然細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)。膠原作為真皮替代物的主要材料已被廣泛應(yīng)用,而本研究采用的重組人膠原是通過基因工程設(shè)計膠原蛋白基因序列而后進(jìn)行翻譯所生產(chǎn)的,相比于從動物提取的膠原,具有親水性、無疾病隱患等優(yōu)點(diǎn),且易于產(chǎn)業(yè)化。本課題從支架結(jié)構(gòu)入手選用靜電紡絲技術(shù)設(shè)計納米纖維支架配合重組人膠原蛋白這一新型仿生材料,以求制備出生物相容性更好的表征屬性更滿意的皮膚組織工程支架,為今后指導(dǎo)開發(fā)新一代人工真皮替代物的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。第一部分重組人膠原納米纖維支架的制備及表征屬性檢測目的:采用靜電紡絲技術(shù)制備出重組人膠原蛋白的納米纖維支架,并通過表征屬性的檢測評價其結(jié)構(gòu)功能,為下步研究打下基礎(chǔ)。方法:采用靜電紡絲技術(shù)制備出重組人膠原納米纖維,與動物膠原納米纖維、重組人膠原凍干海綿作對照,分別進(jìn)行SEM觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)與纖維直徑、孔隙率測量、力學(xué)性能檢測、接觸角測量、體外降解實驗等來評價重組人膠原納米纖維的表征屬性。結(jié)果:重組人膠原納米纖維直徑適宜,交聯(lián)前纖維直徑為(1295±382)nm,交聯(lián)后纖維直徑為(1225±0365)nm�？紫堵矢�,交聯(lián)前孔隙率(93.32±1.13)%,交聯(lián)后孔隙率(92.56±1.67)。親水性好,接觸角為13.85±3.03°。力學(xué)性能滿意,交聯(lián)前平均斷裂伸長(5.19±3.45)%,平均斷裂強(qiáng)度(8.02±1.98)MPa,平均楊氏模量(187±2.33)MPa。降解率可。結(jié)論:我們對重組人膠原納米纖維在直徑、孔隙率、親疏水性、力學(xué)性能等方面的表征屬性進(jìn)行檢測,所獲得結(jié)果滿意,可為進(jìn)一步改良改進(jìn)重組人膠原組織工程支架作指導(dǎo)。第二部分重組人膠原納米纖維支架的生物相容性檢測目的:通過體內(nèi)體外生物相容性試驗評價重組人膠原納米纖維的生物相容性,明確其作為組織工程支架的潛能方法:根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886對重組人膠原納米纖維進(jìn)行溶血試驗和細(xì)胞毒性試驗。提取原代人成纖維細(xì)胞并與納米纖維支架共培養(yǎng),分別通過SEM觀察與MTT法檢測細(xì)胞于重組人膠原納米纖維的黏附與增殖。大鼠皮下埋植實驗與市售可降解縫線羊腸線對照評價重組人膠原蛋白納米纖維在體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)。創(chuàng)面植入實驗與空白組對照,通過組織學(xué)檢測評價其對創(chuàng)面的愈合作用。結(jié)果:用細(xì)胞毒性試驗和溶血試驗結(jié)果顯示材料的細(xì)胞毒性檢測和溶血測試均符合國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886。材料種植成纖維細(xì)胞后SEM觀察和MTT檢測結(jié)果顯示細(xì)胞在支架材料上增殖狀況明顯。大鼠皮下埋植實驗結(jié)果顯示重組人膠原蛋白納米纖維在體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)低于市售可降解縫線羊腸線,創(chuàng)面植入實驗表明重組人膠原蛋白納米纖維對促進(jìn)創(chuàng)面愈合,促進(jìn)血管化作用良好。結(jié)論:重組人膠原納米纖維具備良好的生物相容性,在組織工程中具備很好的應(yīng)用潛能。
【圖文】：

圖 1:(A)為 RHC 納米纖維交聯(lián)前(B)為動物膠原納米纖維交聯(lián)前(C)為 RHC 凍干海綿交聯(lián)前(E)為RHC納米纖維交聯(lián)后(F)為動物膠原納米纖維交聯(lián)后(G)為RHC凍干海綿交聯(lián)后

圖 2：四組材料的纖維直徑. RHSC 為重組人膠原納米纖維，，RHSC-link 為重組原納米纖維交聯(lián)后，COL 為動物膠原納米纖維，COL-link 為動物膠原納米纖維后。*p<0.01二、孔隙率
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 唐云平;鄭強(qiáng);胡斌;蔡謹(jǐn);黃磊;徐志南;;重組膠原蛋白制備及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];食品工業(yè)科技;2016年18期

2 錢永芳;莫秀梅;柯勤飛;何創(chuàng)龍;;靜電紡納米纖維用于組織工程支架[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年22期

3 方壯熙,張璐,韓濤,胡平;PHBV電紡纖維結(jié)構(gòu)與形態(tài)的研究[J];高分子學(xué)報;2004年04期

4 夏照帆,肖仕初,田建廣,程大勝,劉志國,楊s

本文編號：2535967