【摘要】：目的 :觀測原代小鼠胰島在小鼠肝臟脫細胞支架上的生長及功能,探討組織工程學治療糖尿病的新方法。方法 :運用灌注法制備結構完整的全肝臟脫細胞支架并檢測,運用膠原酶P灌注消化法獲取小鼠胰島細胞并行結構和功能完整性分析;將分離純化的原代小鼠胰島經門靜脈灌入全肝臟脫細胞支架,在三維培養(yǎng)體系培養(yǎng)后進行相關檢測。結果:肝臟脫細胞支架檢測未見細胞結構,膠原結構保存完整。支架內剩余DNA定量檢測結果為(38±11)ng/mg ds DNA,生物相容性良好。雙硫腙(dithizone,DTZ)染色胰島呈現特異性猩紅色,葡萄糖刺激實驗提示在高糖組中培養(yǎng)的原代小鼠胰島胰島素分泌功能明顯高于低糖組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);將胰島移植入肝臟脫細胞支架培養(yǎng)5 d后胰島定植,且胰島素基因表達顯示脫細胞支架三維培養(yǎng)中胰島素表達水平與平面培養(yǎng)相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:肝臟脫細胞支架三維培養(yǎng)體系中的胰島細胞比傳統(tǒng)平面培養(yǎng)具有更佳的細胞活力及更有效的胰島素分泌功能。
[Abstract]:Aim: to observe the growth and function of primary mouse islets on mouse liver acellular scaffolds and to explore a new method of tissue engineering in the treatment of diabetes mellitus. Methods: the whole liver acellular scaffolds with intact structure were prepared by perfusion and detected. The pancreatic islet cells were obtained by collagenase P perfusion digestion method and the structure and functional integrity of pancreatic islet cells were analyzed. The isolated and purified primary mouse islets were infused into the whole liver acellular scaffolds through portal vein, and the correlation was detected after culture in three-dimensional culture system. Results: no cellular structure was found in the liver acellular scaffolds, and the collagen structure was preserved intact. The biocompatibility of (38 鹵11) ng/mg ds DNA, was better than that of in-stent residual DNA. Pancreatic islets stained with dithizone (dithizone,DTZ) showed specific scarlet color. Glucose stimulation test showed that the insulin secretion function of primary mice cultured in high glucose group was significantly higher than that in low glucose group (P0.01). Pancreatic islets were transplanted into liver acellular scaffolds for 5 days, and insulin gene expression showed that insulin expression level in three-dimensional culture of acellular scaffolds was significantly higher than that in horizontal culture (P0.01). Conclusion: pancreatic islet cells in the three-dimensional culture system of liver acellular scaffolds have better cell viability and more effective insulin secretion function than those in the traditional planar culture system.
【作者單位】： 南通大學附屬醫(yī)院普外科;蘇州大學附屬第一醫(yī)院普外科;
【基金】：國家自然科學基金資助(81471801)
【分類號】：R318.08

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本文編號：2442249