【摘要】：近年來,血液接觸材料在心血管疾病的臨床治療中得到了飛速的發(fā)展。但其作為異體材料,植入人體時所引起的血栓問題至今仍未得到妥善解決。大量研究證實,任何一種異體材料在與血液相接觸時都會不可避免的引起凝血反應。因此,一些研究者試圖通過合理的設計在材料表面模擬人體纖溶系統(tǒng),賦予材料溶解初級血栓凝塊的能力。表面纖溶系統(tǒng)的構建為實現(xiàn)真正意義上的抗血栓材料提供了一種全新的思路。構建表面纖溶系統(tǒng)的關鍵在于使材料能夠從血液中選擇性結合纖溶系統(tǒng)核心蛋白質——血纖維蛋白溶酶原(Plg)及其激活劑(如組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)),通過二者之間的相互作用產生具有降解纖維蛋白活性的纖維蛋白溶酶,實現(xiàn)對初生血栓的溶解。目前,人們普遍認為ε-氨基和羧基自由的賴氨酸(ε-賴氨酸)對Plg及t-PA具有特異性親和力,因此,ε-賴氨酸在材料表面的固定將有可能實現(xiàn)表面纖溶系統(tǒng)的構建。 基于上述分析,本論文的主要工作是將ε-賴氨酸引入到材料表面,實現(xiàn)表面纖溶系統(tǒng)的構建,并試圖從蛋白質水平闡述其作用機理。在此基礎上,將ε-賴氨酸化表面的概念應用到冠脈支架上,實現(xiàn)表面纖溶系統(tǒng)在心血管植入材料表面的構建。具體研究內容如下： 首先制備了ε-賴氨酸和α-賴氨酸(α-氨基和羧基自由的賴氨酸)修飾的模型金表面,并系統(tǒng)研究了二者與Plg之間的相互作用。采用自組裝二肽分子Cys-α-NH2-Lys(CK1)和Cys-ε-NH2-Lys(CK2)的方式實現(xiàn)了ε-賴氨酸和α-賴氨酸在模型金表面的固定。利用水接觸角和橢偏厚度測試對改性表面的性質進行表征。通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)比較血漿中的Plg在兩種賴氨酸化表面的吸附情況,證實ε-賴氨酸確實能夠實現(xiàn)對Plg的選擇性結合。通過表面等離子體共振儀(SPR)考察了不同濃度的Plg在兩種賴氨酸化表面的動態(tài)結合過程。結果表明：ε-賴氨酸化表面對Plg具有更高的結合速率常數(shù)和更低的解離速率常數(shù),其親和常數(shù)接近于α-賴氨酸化表面的15倍,從結合動力學的角度進一步證實ε-賴氨酸對Plg具有更高的特異性親和力。利用纖維蛋白溶酶活性測試,證明該ε-賴氨酸化表面結合的Plg具有更高的纖溶酶轉化活性。該研究通過最簡單的表面設計,證實了ε-賴氨酸是實現(xiàn)纖溶表面的關鍵結構,為后續(xù)纖溶功能材料的制備提供了理論依據(jù)。 接下來將對Plg具有特異性親和力的ε-賴氨酸固定在冠脈支架表面,實現(xiàn)表面纖溶系統(tǒng)在心血管植入材料表面的構建,并對其血液相容性進行了系統(tǒng)研究。采用表面引發(fā)原子轉移自由基聚合法在L605鉆鉻合金支架表面聚合甲基丙烯酸2-羥乙酯(HEMA),并將ε-賴氨酸共價接枝在poly(HEMA)內側鏈末端。通過X射線光電子能譜測試證實整個改性過程的成功性。同位素標記的纖維蛋白原及白蛋白吸附測試表明poly(HEMA)修飾的L605表而具有極好地排斥非特異性蛋白質吸附的能力,問接法ELISA測試表明poly(HEMA)-Lys修飾的L605表而能夠從血漿中選擇性結合纖溶酶原。血漿復鈣化測試證明該賴氨酸化表面結合的Pig經t-PA激活后能夠有效地溶解血漿中的纖維蛋白凝塊,而且該纖溶能力具有一定的穩(wěn)定性和可再生性,即能通過Plg在表面的動態(tài)交換保持其活性,進而實現(xiàn)對初生血栓的多次溶解。本研究為解決支架內血栓問題提供了一種的新的思路,同時也為纖溶表面的臨床應用奠定了重要的基礎。
[Abstract]:In recent years, blood contact materials have developed rapidly in the clinical treatment of cardiovascular diseases. However, as allograft material, the problem of thrombus caused by implantation of human body has not been properly resolved. A large number of studies have shown that any allograft material will inevitably lead to a clotting response when contacted with blood. Therefore, some researchers have attempted to provide the material with the ability to dissolve the primary thrombus block by simulating a human fibrinolysis system on the surface of the material through a reasonable design. The construction of the surface fiber-soluble system provides a brand-new idea for the realization of the anti-thrombotic material in real sense. the key to constructing a surface fiber-soluble system is to enable the material to selectively bind to the fibrinolytic system core protein _ plasminogen (plg) and its activator (e. g., tissue-type plasminogen activator (t-pa)) from the blood, The fibrinolysis enzyme with degradation of fibrin activity is generated by the interaction between the two, and the dissolution of the primary thrombus is realized. At present, it is generally believed that the free lysine (cos-lysine) of glucosamine-amino group and poly-lysine has a specific affinity for Plg and t-PA, and therefore, the immobilization of poly-lysine on the surface of the material will be possible to achieve the construction of a surface fiber-soluble system. Based on the above analysis, the main work of this paper is to introduce poly-lysine into the surface of the material, realize the construction of the surface fiber-soluble system, and try to explain its function from the protein level. Mechanism. On the basis of this, the concept of the surface is applied to the coronary artery stent, which realizes the surface of the surface fiber-soluble system on the surface of the cardiovascular implant material. Construction. Specific research content The model gold surface modified with poly-lysine and poly-lysine was first prepared, and the relationship between them and Plg was studied systematically. The interaction is carried out by the method of self-assembly of the dipeptides of the dipeptide molecules, i.e., CK1 and CK2-NH2-Lys (CK2), in the model gold. Surface fixation. Use of water contact angle and thickness test to test the properties of the modified surface By enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), the adsorption of Plg in plasma on two lysine surfaces was compared. Selective binding. Plg of Plg at different concentrations were examined by surface plasmon resonance (SPR) on two lysine surfaces The results showed that P-lysine surface had a higher binding rate constant and lower dissociation rate constant for Plg, and its affinity constant was 15 times higher than that of the L-lysine surface. The affinity of the opposite sex. Using the fibrinolytic enzyme activity test, it is proved that the Plg of the bound-lysine surface has higher fiber solubility. The enzyme transformation activity was confirmed by the simplest surface design. The key structure of fiber-soluble surface was confirmed by the study, and the preparation of the functional material was provided. A theoretical basis is provided. Next, Plg-lysine immobilized on the surface of the coronary stent is immobilized on the surface of the coronary stent, so that the surface of the vascular implant material is constructed on the surface of the surface fiber-soluble system, and the blood compatibility of the surface fiber-soluble system is compatible with the surface of the coronary stent. A systematic study was carried out. 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) was polymerized on the surface of L605-drilled chromium alloy stent using surface-initiated atom transfer free radical polymerization. MA) The end of the inside chain. It was confirmed by X-ray photoelectron spectroscopy. The success of the modification process. The isotope labeled fibrinogen and albumin adsorption test showed that HEMA modified L605 table had the ability to repel non-specific protein adsorption, and asked the ELISA test to test the L605 table modified by HEMA-Lys to be selected from plasma. The plasma complex calcification test demonstrated that Pig, which binds to the lysine surface, can effectively dissolve fibrin clots in plasma after t-PA activation, and that the fibrinolysis capacity has certain stability and stability, that is, it can be moved by Plg on the surface. the state exchange maintains its activity, The study provides a new way to solve the problem of thrombosis in the stent, and also provides a clinical application for the surface of the fiber.
【學位授予單位】：武漢理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R318.08

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本文編號：2311475