【摘要】：目的研究植物雌激素葛根素復(fù)合多孔鉭支架材料對(duì)MG-63成骨細(xì)胞增殖及成骨細(xì)胞因子COL-I、OC和OPN表達(dá)的影響,試圖探討植物類雌激素葛根素復(fù)合多孔鉭材料對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用葛根素和多孔鉭支架材料治療骨愈合和再生提供可行性的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1大體觀察和掃描電鏡觀察國(guó)產(chǎn)多孔鉭支架的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征;2 MG-63成骨細(xì)胞培養(yǎng),并采用COL-I免疫細(xì)胞化學(xué)染色及ALP染色進(jìn)行MG-63成骨細(xì)胞鑒定;3倒置相差顯微鏡觀察成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài);4實(shí)驗(yàn)分組,葛根素組:不同終濃度葛根素(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)分別與MG-63細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng),并篩選出葛根素作用最佳劑量濃度組;多孔鉭組:多孔鉭支架與MG-63細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng);葛根素多孔鉭組:多孔鉭支架材料與葛根素藥物干預(yù)MG-63成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng);空白組:單純MG-63成骨細(xì)胞培養(yǎng);5 CCK-8法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖狀態(tài);6掃描電鏡觀察葛根素復(fù)合成骨細(xì)胞在多孔鉭上黏附、增殖的形態(tài)變化;7免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-I、OC、OPN的表達(dá);8實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組成骨細(xì)胞COL-I、OC、OPN mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1大體觀察多孔鉭支架為表面粗糙不平,質(zhì)硬,表面分布均勻、密集的微孔,呈蜂窩狀;掃描電鏡觀察多孔鉭支架表面及斷面分布大量均勻的微孔結(jié)構(gòu),內(nèi)部孔隙之間相互連通,呈三維的多孔結(jié)構(gòu)。2 COL-I免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒狀,ALP染色顯示成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)藍(lán)紫色顆粒,細(xì)胞有較強(qiáng)的ALP活性及鈣化能力,具有成骨細(xì)胞特性。3倒置相差顯微鏡觀察,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞體積逐漸增大,數(shù)量逐漸增加,細(xì)胞形態(tài)多以長(zhǎng)三角形、長(zhǎng)梭形為主,胞漿突起增多,細(xì)胞間逐漸聚集融合形成細(xì)胞集落。4隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),成骨細(xì)胞不斷生長(zhǎng)增殖,成骨細(xì)胞的OD值不斷升高。在各時(shí)間點(diǎn),葛根素多孔鉭組成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖狀況與其它3組相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組細(xì)胞增殖活性顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組之間相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組細(xì)胞增殖活性均高于空白組,但葛根素不同濃度組,以葛根素1μmol/L組細(xì)胞增殖最快;葛根素組和多孔鉭組之間細(xì)胞增殖活性相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5掃描電鏡觀察,隨著復(fù)合培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),成骨細(xì)胞在多孔鉭支架表面及微孔內(nèi)疊層黏附生長(zhǎng),逐漸伸展并伸出偽足,細(xì)胞偽足逐漸融合形成片狀,細(xì)胞分泌的基質(zhì)、膠原完全覆蓋材料表面。6 COL-I、OC和OPN表達(dá)定位于成骨細(xì)胞胞漿,陽(yáng)性反應(yīng)呈棕黃色,分別在第3d和第6d復(fù)合培養(yǎng)時(shí),對(duì)于COL-I和OC的表達(dá),葛根素多孔鉭組與其它3組相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組COL-I和OC的表達(dá)均顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組COL-I和OC的表達(dá)均高于空白組;葛根素組和多孔鉭組之間相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)于OPN的表達(dá),各組之間相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。比較第3d和第6d葛根素多孔鉭組COL-I、OC和OPN表達(dá)量,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),第6d葛根素多孔鉭組COL-I、OC和OPN的表達(dá)量明顯高于第3d葛根素多孔鉭組的三者表達(dá)。7對(duì)于COL-I和OC的mRNA相對(duì)表達(dá)量,葛根素多孔鉭組和其它3組之間相比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組COL-I和OC的mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組之間相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組COL-I和OC的mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于空白組;葛根素組和多孔鉭組之間相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組之間COL-I和OC的mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)差別。對(duì)于OPN mRNA相對(duì)表達(dá)量,各組之間相比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1葛根素與國(guó)產(chǎn)多孔鉭/成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng),可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、黏附生長(zhǎng)并及細(xì)胞外基質(zhì)的分泌。2葛根素能促進(jìn)多孔鉭/成骨細(xì)胞復(fù)合物中成骨細(xì)胞成骨因子COL-I、OC、OPN基因及蛋白的表達(dá),從而促進(jìn)成骨。3不同濃度葛根素均可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖,其中以葛根素1μmol/L為最適宜濃度。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R318.08;R68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2309890