本文選題：PLGA + 納米　； 參考：《第二軍醫(yī)大學》2013年博士論文

【摘要】：創(chuàng)傷性或醫(yī)源性的硬脊膜缺損在脊柱及神經(jīng)外科有一定的發(fā)生率，處理不當可引發(fā)持續(xù)性腦脊液漏、低顱內壓綜合征、急性氣道阻塞、腦脊液囊腫、粘連性蛛網(wǎng)膜炎、椎管內感染、甚至危及生命的化膿性腦膜炎等一系列并發(fā)癥。然而對于硬脊膜缺損的治療，，由于硬脊膜的不可再生性、現(xiàn)有的硬脊膜替代材料均無模仿天然硬脊膜空間結構的設計理念以及缺乏理想的修復方法，導致目前在臨床上不同程度的存在治療療程長、痛苦大、組織愈合的形式以疤痕組織為主以及痊愈的標準也僅僅是腦脊液漏停止等諸多不足。硬脊膜缺損的 高質量‖（既能實現(xiàn)術后硬脊膜再生、預防硬膜外粘連及瘢痕，又能實現(xiàn)術中有效封堵）依然是臨床亟待解決的難題。要想實現(xiàn)硬脊膜的再生，必須先明確硬脊膜的空間結構及表觀形貌特征，并以此構建與之空間構象近似的替代材料；而要想實現(xiàn)術中有效封堵，必須研制出一種理想的修復方法；同時，要想預防硬膜外粘連及瘢痕形成，替代材料必須兼具此功能。由于硬脊膜主要由膠原基質和成纖維細胞組成，其膠原束具有特殊的取向性結構，因此本項目提出采用具有不同功能的雙層復合PLGA納米纖維膜片和組織工程技術來構建組織工程化人工硬脊膜，結合粘合力強且具有排水性能的貽貝粘蛋白生物膠，來實現(xiàn)硬脊膜再生及術中有效封堵。擬構建的硬脊膜替代材料設計為雙層結構：內層（修復層）專司硬脊膜的再生，利于靜電紡絲法制備與天然硬脊膜結構近似的有 取向性‖（有序）的聚乳酸/乙醇酸共聚物（PLGA）納米纖維膜，作為組織工程支架，促使種子細胞（成纖維細胞）接種后所合成的膠原束也呈取向性分布，使新生組織接近天然硬脊膜；外層（加強層）應用無 取向性‖（無序）PLGA-殼聚糖納米纖維膜片，專司增強內層力學性能、預防硬膜外粘連及瘢痕形成；內外層之間采用非縫合膠粘技術（貽貝粘蛋白），既可將外層與硬脊膜牢固粘合成一體，又能避免粘合膠與腦脊液直接接觸以及人為封閉膜體風險，以期實現(xiàn)術中快速、確切的封閉硬脊膜囊。 研究目的：構建與羊硬脊膜空間結構近似的復合組織工程化PLGA納米纖維膜，評價體內回植修復羊硬脊膜缺損的效果。 研究方法：①獲取山羊硬脊膜的表觀形貌及三維結構：成年山羊硬脊膜取材，對標本進行肉眼觀察、組織學觀察、掃描電鏡以及透射電鏡觀察。②3種人工硬脊膜的制備及評價：利用靜電紡絲法制備有序及無序PLGA納米纖維膜；殼聚糖溶液單面涂層無序PLGA納米纖維膜片，制備PLGA-殼聚糖膜片；手工撕成單絲的無紡PGA纖維，以同一方向均勻纏繞于特制U型鋼絲，制備有序PGA纖維膜片。對有序及無序PLGA納米纖維膜片進行物理性能及生物相容性檢測。③3種組織工程化人工硬脊膜體外構建：將體外分離、擴增的山羊皮膚成纖維細胞，作為種子細胞，分別接種于有序PLGA、無序PLGA納米纖維膜以及有序PGA纖維膜上，觀察種子細胞在支架材料上的黏附、生長及基質分泌等情況。④組織工程化人工硬脊膜修復羊硬脊膜缺損的系列實驗:1）將9只成年山羊隨機分為3組：有序PLGA組、無序PLGA組及有序PGA組，分別采用上述3種膜片作為內層覆蓋山羊腰段硬脊膜缺損（0.6cm×0.5cm），然后以無序PLGA-殼取糖膜片作為外層，涂抹貽貝粘蛋白粘貼于硬脊膜缺損周緣；術后1月取材，對術后并發(fā)癥、封堵效果、與周圍組織粘連、炎性反應、材料降解以及硬脊膜的再生質量等進行評價。2）對3種膜片中修復效果最佳者進行再次分組：組織工程化材料組、單純材料組，體內回植于6只山羊，術后3月取材，按前述方法對其進行評價。3）將實驗二中效果最佳膜片再次進行山羊體內回植，評價其遠期療效（6個月）。 結果：①山羊硬脊膜主要由膠原纖維及散在分布的成纖維細胞組成的半透明薄膜，膠原纖維直徑介于400nm～1000nm之間，呈 取向性‖排列，微觀下可見硬脊膜內外表面呈連}坎歡系納椒�。⒄E捎鎂駁綬乃糠ǔ曬χ票賦鲇胩烊揮布鼓と占浣峁梗ń涸本都芭帕校┙頻撓行虻腜LGA納米纖維膜片以及無序PLGA納米纖維膜片，二種膜片均具有良好的生物相容性及力學性能；成功制備出PLGA-殼聚糖膜片。③成功構建組織工程化有序PLGA、無序PLGA及有序PGA人工硬脊膜膜片。④術后1月取材，證實組織工程化有序PLGA膜優(yōu)于組織工程化無序PLGA膜，組織工程化無序PLGA膜優(yōu)于組織工程化PGA膜。⑤術后3月取材，證實組織工程化有序PLGA膜優(yōu)于單純有序PLGA膜。⑥術后6月取材，證實組織工程化有序PLGA膜體內回植再生膜的表觀形貌及三維結構與天然硬脊膜高度相似。 結論：復合組織工程化PLGA納米纖維膜實現(xiàn)了真正意義的硬脊膜再生以及達到預防硬膜外瘢痕及粘連的目的，非縫合技術應用（貽貝粘蛋白）可顯著減少術后腦脊液漏發(fā)生率。
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本文編號：2099579