本文選題：成骨細(xì)胞 + 三維立體培養(yǎng)　； 參考：《四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年02期

【摘要】：目的建立大鼠乳鼠顱骨成骨細(xì)胞(ROBs)的膠原水凝膠三維立體培養(yǎng)模型。方法取新生SD大鼠顱骨,通過(guò)酶消化法獲得成骨細(xì)胞。將傳代培養(yǎng)的第一代(標(biāo)記為P1代)ROBs與不同濃度Ⅰ型鼠尾膠原(膠原濃度為1、2、3mg/mL)、DMEM培養(yǎng)液、NaOH等混合,調(diào)節(jié)混合液pH并將其置于37℃使膠原凝固成形,建立細(xì)胞的三維立體培養(yǎng)。ROBs立體培養(yǎng)3d后,普通顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及密度,培養(yǎng)6d后二乙酸熒光素/碘化丙啶(FDA/PI)染色法鑒定細(xì)胞存活率;培養(yǎng)3d、6d、9d后CCK-8檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞活性,篩選出三維立體培養(yǎng)最佳膠原濃度及最佳培養(yǎng)體系。掃描電鏡和HE染色觀察最佳培養(yǎng)體系中ROBs細(xì)胞形態(tài)以及細(xì)胞與膠原復(fù)合物的黏附和分布情況。結(jié)果膠原濃度為2mg/mL培養(yǎng)體系,膠原成形最好、硬度最高。ROBs三維立體培養(yǎng)3d后,膠原濃度為1mg/mL、2mg/mL培養(yǎng)體系中細(xì)胞飽滿、多呈長(zhǎng)梭形。膠原濃度為3mg/mL的培養(yǎng)體系細(xì)胞多呈圓形并固縮。膠原濃度為2mg/mL培養(yǎng)體系中,細(xì)胞存活率最高(P0.05),細(xì)胞活性強(qiáng)于1mg/mL組和3mg/mL組(P0.05)。2mg/mL培養(yǎng)體系組掃描電鏡結(jié)果顯示細(xì)胞與膠原復(fù)合物黏附較好且細(xì)胞形態(tài)正常,HE染色結(jié)果顯示細(xì)胞在膠原中分布均勻且細(xì)胞形態(tài)正常。結(jié)論膠原濃度為2mg/mL時(shí),能夠成功建立ROBs膠原水凝膠三維立體培養(yǎng)模型,該模型中膠原成形較好,硬度較高,細(xì)胞生存良好,分布均勻,能夠維持正常形態(tài)及活性,適用于后期科學(xué)研究。
[Abstract]:Objective to establish a three-dimensional culture model of collagen hydrogel in rat calvarial osteoblast (ROBs). Methods the osteoblasts were obtained from the cranium of newborn SD rats by enzyme digestion. The first generation (labeled P1 generation) ROBs was mixed with different concentration of rat tail collagen (1,2,3mg/mL), DMEM culture solution, NaOH and so on. The mixed liquid pH was placed at 37 C to solidify the collagen, and the cell morphology and density were observed by a three-dimensional culture of.ROBs for 3D. The cell viability was identified by two fluorescein / FDA/PI staining method after 6D, and the cell viability was determined by CCK-8 detection after 3D, 6D and 9D, and three of the cells were screened. The optimum collagen concentration and the best culture system were cultured. The morphology of ROBs cells in the optimum culture system and the adhesion and distribution of collagen complex were observed by scanning electron microscopy and HE staining. Results collagen concentration was 2mg/mL culture system, collagen formation was best, and the highest hardness of.ROBs was.ROBs three-dimensional culture 3D, collagen concentration was 1mg/mL, 2 The cells in the culture system of mg/mL were full and long shuttle shaped. The cells in the culture system with collagen concentration of 3mg/mL were mostly round and fixed. The cell viability was the highest in the collagen concentration 2mg/mL culture system (P0.05). The cell activity was stronger than that of the 1mg/mL group and the 3mg/mL group (P0.05).2mg/mL culture body group. The results showed that the cell morphology was normal and the HE staining results showed that the cells were evenly distributed in collagen and the cell morphology was normal. Conclusion when the collagen concentration is 2mg/mL, the three-dimensional culture model of ROBs collagen hydrogel can be successfully established. In this model, the collagen formation is better, the hardness is higher, the cell survival is good, the distribution is uniform, and it can maintain normal form and maintain normal form. The activity is suitable for late scientific research.
【作者單位】： 蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院骨科研究所;蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81270963,No.81471090)資助
【分類號(hào)】：R318.08;Q813.11

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本文編號(hào)：1962664