發(fā)布時間：2017-10-24 04:01

  本文關(guān)鍵詞：磺酸化甲殼素和磺酸化殼聚糖的生物學功能和安全性研究

  更多相關(guān)文章： 磺酸化甲殼素 磺酸化殼聚糖 抗凝血 腫瘤細胞 生物安全性

【摘要】：目的:甲殼素、殼聚糖糖殘基上羥基能與含氧無機酸發(fā)生酯化反應(yīng),氨基上也可發(fā)生酯化反應(yīng)。在甲殼素、殼聚糖的眾多酯化反應(yīng)中，研究最多的是兩者的硫酸酯化反應(yīng)。酯化產(chǎn)物磺酸化甲殼素（S-CT）、磺酸化殼聚糖（S-CTS）具有良好的水溶性、成膜性、生物降解性等,在輕工業(yè)、食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。已有研究表明S-CT、S-CTS具有抗凝血、抗血栓、抗氧化、抗病毒、抗動脈硬化、抗腫瘤等多種生物學活性，但對其生物安全性評價甚少。本論文通過磺化反應(yīng)分別合成S-CT、S-CTS,旨在研究S-CT、S-CTS的生物安全性，探討其抗凝效果，對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞（HUVEC）體外生長影響，以及對人宮頸癌細胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細胞、人胃癌細胞SGC-7901體外生長的影響,為S-CT、S-CTS安全性應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法： 1、通過甲殼素/殼聚糖的羥基（尤其是C6-OH）與磺化劑（氯磺酸/濃硫酸混酸）發(fā)生低溫非均相酯化反應(yīng)合成磺酸化甲殼素（S-CT）/磺酸化殼聚糖（S-CTS）。分別對S-CT、S-CTS進行純化及理化性質(zhì)測定。 2、通過兔皮內(nèi)刺激反應(yīng)，評價兩種材料對機體的短期刺激反應(yīng)強度；以膠體、膜片為載體，分別評價兩種材料的皮下、肌肉組織相容性及體內(nèi)降解性；通過溶血率測定，評價兩種材料的血液相容性。 3、通過全血凝血試驗研究S-CT、S-CTS體外抗凝血功能，，在細胞水平，采用顯微觀察結(jié)合MTT法評價S-CT、S-CTS對人血管內(nèi)皮細胞HUVEC、人宮頸癌細胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細胞以及人胃癌細胞SGC-7901體外生長的作用 結(jié)果： 1、紅外圖譜顯示兩種材料均發(fā)生磺化取代，測定兩者均具有較高取代度。 2、兩種材料皮內(nèi)刺激反應(yīng)結(jié)果均符合國家要求，表現(xiàn)出良好的血液相容性。膠體在體內(nèi)降解極快，炎癥反應(yīng)極輕微。膜片在體內(nèi)呈線性速率降解，炎癥反應(yīng)隨時間逐漸減輕，兩種材料整體表現(xiàn)出良好的生物組織相容性以及體內(nèi)降解性。 3、S-CT、S-CTS在2.5-10mg/mL濃度范圍內(nèi)，均具有明顯的抗凝作用，其中S-CTS的抗凝效果優(yōu)于S-CT。兩種材料在125-250μg/mL濃度范圍內(nèi)對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞（HUVEC）體外生長有一定的促進作用，其中以250mg/mLS-CT,作用2d，促進效果最為顯著。兩種材料在62.5-1000μg/mL濃度范圍內(nèi)對人宮頸癌細胞(HeLa)、人喉表皮樣癌細胞（HEp-2）、人胃癌細胞（SGC-7901）的體外增殖都有顯著抑制作用，S-CT對三種癌細胞最大抑制率分別可達到48.52%（6d）、35.73%（6d）、57.43%（6d），S-CTS對三種癌細胞最大抑制率分別可達到65.23%（6d）、43.19%（6d）、44.32%（4d），并且基本遵循抑制率隨著作用時間的增加、濃度的增加而增加這個趨勢，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。 結(jié)論：兩種材料均具有良好的生物相容性，體內(nèi)降解性良好，各項指標均符合國家對安全性實驗的要求。在生物學功能方面，表現(xiàn)為抗凝效果顯著；對正常人臍血管內(nèi)皮細胞（HUVEC）體外生長有一定促進作用；對腫瘤細胞：HeLa細胞、HEp-2細胞、SGC-7901細胞體外生長有明顯抑制作用，為兩種材料的進一步生物學功能的研究以及今后可能的運用提供一定依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：磺酸化甲殼素 磺酸化殼聚糖 抗凝血 腫瘤細胞 生物安全性
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 目錄11-16
• 第一章 引言16-34
• 1 甲殼素/殼聚糖理化性質(zhì)概述16-18
• 1.1 甲殼素理化性質(zhì)16-17
• 1.2 殼聚糖的理化性質(zhì)17-18
• 2 甲殼素/殼聚糖的改性18-24
• 2.1 �；磻�(yīng)18-19
• 2.2 酯化反應(yīng)19-20
• 2.2.1 硫酸酯19
• 2.2.2 黃原酸酯19-20
• 2.2.3 磷酸酯20
• 2.2.4 硝酸酯20
• 2.3 醚化反應(yīng)20-21
• 2.4 西佛堿反應(yīng)21
• 2.5 烷基化反應(yīng)21-22
• 2.6 季銨化反應(yīng)22
• 2.7 氧化反應(yīng)22-23
• 2.8 水解反應(yīng)23
• 2.9 接枝共聚反應(yīng)23-24
• 2.10 交聯(lián)反應(yīng)24
• 3 甲殼素/殼聚糖及其衍生物的應(yīng)用24-28
• 3.1 在食品工業(yè)中的應(yīng)用24-25
• 3.2 在輕紡工業(yè)中的應(yīng)用25-26
• 3.3 在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用26
• 3.4 在醫(yī)藥衛(wèi)生方面的應(yīng)用26-28
• 4 甲殼素、殼聚糖硫酸酯概述28-32
• 4.1 甲殼素、殼聚糖硫酸酯制備方法28-29
• 4.1.1 磺化體系選擇28-29
• 4.1.2 經(jīng)磺化劑預(yù)處理后的殼聚糖29
• 4.2 甲殼素、殼聚糖硫酸酯的生物活性29-32
• 4.2.1 抗凝血活性29-31
• 4.2.2 抗血栓活性31
• 4.2.3 抗氧化活性31
• 4.2.4 抗病毒活性31-32
• 4.2.5 抗腫瘤活性32
• 5 立題依據(jù)32-34
• 第二章 S-CT、S-CTS 材料合成純化及理化性質(zhì)測定34-41
• 1 材料、試劑與儀器34-35
• 1.1 材料與主要試劑34
• 1.2 主要儀器34-35
• 2 實驗方法35-38
• 2.1 S-CTS 、S-CT 材料合成及純化35-36
• 2.2 S-CT、S-CTS 理化性質(zhì)測定36-38
• 2.2.1 S-CT、S-CTS 水分測定36
• 2.2.2 S-CT、S-CTS 灰分測定36
• 2.2.3 pH 值測定36
• 2.2.4 等電點測定36-37
• 2.2.5 旋轉(zhuǎn)黏度測定37
• 2.2.6 取代度測定37
• 2.2.7 脫乙酰度測定37-38
• 2.2.8 紅外光譜38
• 2.2.9 分子量測定38
• 3 結(jié)果與討論38-40
• 3.1 S-CT、S-CTS 主要理化性質(zhì)38-39
• 3.2 紅外光譜39-40
• 4 本章小結(jié)40-41
• 第三章 S-CT、S-CTS 的生物相容性和生物降解性評價41-57
• 1 材料、試劑與儀器41-42
• 1.1 材料與主要試劑41-42
• 1.2 主要儀器42
• 2 實驗方法42-45
• 2.1 溶血率測定42-43
• 2.2 兔皮內(nèi)反應(yīng)實驗43
• 2.3 S-CT、S-CTS 膠體組織相容性43-44
• 2.4 S-CT、S-CTS 膜片組織相容性44
• 2.5 組織切片44-45
• 2.6 HE 染色45
• 3 結(jié)果與討論45-56
• 3.1 溶血率測定45-46
• 3.2 皮內(nèi)刺激反應(yīng)46
• 3.3 膠體溶液組織相容性46-50
• 3.4 膜片組織相容性50-56
• 4 本章小結(jié)56-57
• 第四章 S-CT、S-CTS 的生物學功能57-79
• 1 材料、試劑與儀器57-58
• 1.1 材料與主要試劑57-58
• 1.2 主要儀器58
• 2 實驗方法58-62
• 2.1 全血凝血時間測定58
• 2.2 對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞 HUVEC 生長的影響58-59
• 2.3 對腫瘤細胞生長的抑制作用59-62
• 2.3.1 對人宮頸癌細胞 HeLa 生長的抑制作用59-60
• 2.3.2 對人喉表皮樣癌細胞 HEp-2 生長的抑制作用60-61
• 2.3.3 對人胃癌細胞 SGC-7901 生長的抑制作用61-62
• 3 結(jié)果及分析62-77
• 3.0 全血凝血時間測定62-63
• 3.1 對 HUVEC 細胞生長的促進作用63-65
• 3.2 對 HeLa 細胞生長的抑制作用65-69
• 3.3 對 HEp-2 細胞生長的抑制作用69-73
• 3.4 對 SGC-7901 細胞生長的抑制作用73-77
• 4 本章小結(jié)77-79
• 全文總結(jié)79
• 結(jié)論79-80
• 論文的創(chuàng)新點80
• 論文存在的不足80-81
• 參考文獻81-88
• 致謝88
• 個人簡歷88
• 發(fā)表的學術(shù)論文88-89

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