本文關(guān)鍵詞：脂肪乳對(duì)中心靜脈導(dǎo)管表面混合生物膜形成的影響

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【摘要】：[目的]：探索脂肪乳對(duì)中心靜脈導(dǎo)管表面大腸桿菌-白色念珠菌混合生物膜(Mixed-Species Biofilm,MSB F)形成的影響。[方法]：1.構(gòu)建中心靜脈導(dǎo)管表面白色念珠菌-大腸桿菌混合生物膜體外膜型：通過XTT、結(jié)晶紫、激光共聚焦顯微鏡、掃描電鏡技術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)生物膜的形成過程；2.在1%、5%、10%、15%、20%脂肪乳濃度下對(duì)白色念珠菌-大腸桿菌混合生物膜進(jìn)行培養(yǎng),使用XTT測(cè)定病原菌生長動(dòng)力；結(jié)晶紫半定量測(cè)定生物膜形成厚度；活死菌染色后采用CLSM觀察生物膜內(nèi)活、死菌分布情況；熒光原位雜交技術(shù)觀察生物膜內(nèi)部兩種病原菌的分布、結(jié)構(gòu)；掃描電鏡觀察生物膜表面病原菌的分布、結(jié)構(gòu)。3.采用qRT-PCR方法檢測(cè)10%脂肪乳濃度對(duì)混合生物膜中大腸桿菌基因(flhDC、iha)白色念珠菌基因(HTA1、hwp1)的表達(dá)情況的影響。[結(jié)果]：1、XTT、結(jié)晶紫檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽性混合組生物膜生長動(dòng)力及形成能力高于陰性混合組,均高于單菌種組。2、掃描電鏡結(jié)果顯示,隨著培養(yǎng)時(shí)間增加,PVC材料表面生物結(jié)構(gòu)越加復(fù)雜,混合培養(yǎng)組表面形成團(tuán)塊狀、層疊狀混合生物膜,可見大腸桿菌和白色念珠菌的孢子、菌絲呈重疊、混雜生長,白色念珠菌周圍(孢子、假菌絲、菌絲)粘附大量大腸桿菌,形成復(fù)雜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。與陰性混合組相比,陽性混合組生物膜結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜,病原菌相互關(guān)系更加密切。3、脂肪乳組混合生物膜生長動(dòng)力及生物膜形成能力均高于對(duì)照組,10%脂肪乳濃度下混合生物膜形成情況最佳。脂肪乳濃度在5%及以上組掃描電鏡檢查發(fā)現(xiàn),PVC材料表面,Ca孢子、假菌絲、菌絲、E.coil及脂肪乳成分相互重疊形成結(jié)構(gòu)致密的生物膜。熒光原位雜交后行CLSM觀察發(fā)現(xiàn),生物膜內(nèi)部兩種病原菌也是相互重疊,混雜生長。4、培養(yǎng)24h生物膜熒光定量PCR結(jié)果：與對(duì)照組相比,脂肪乳組flhDC、iha、HTA1、hwp1基因明顯上調(diào),分別為6.0567倍、22.1474倍、2.3914倍、1.7218倍。培養(yǎng)72h生物膜熒光定量PCR結(jié)果：與對(duì)照組相比,脂肪乳組flhDC、 iha、HTA1、hwp1基因均下調(diào),分別為0.0633倍、0.0813倍、0.7911倍、0.0706倍。[結(jié)論]：1、大腸桿菌MC1000和白色念珠菌ATCC10231在菌液濃度為1×106CFU/mL共培養(yǎng)24h能在PVC材料表面形成E.Coil-Ca復(fù)雜混合生物膜。2、大腸桿菌粘附于白色念珠菌假菌絲、菌絲孢子表面,相互交叉、重疊形成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的E.Coil-Ca混合生物膜,其生物膜較單菌株生物膜結(jié)構(gòu)復(fù)雜,厚度增加。3、脂肪乳可以促進(jìn)E.coil-Ca混合生物膜形成,10%脂肪乳濃度效果最佳。脂肪乳成分同時(shí)也參與細(xì)菌生物膜的組成,使E.coil-Ca混合生物膜結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜,生物膜內(nèi)部大腸桿菌粘附于白色念珠菌假菌絲、菌絲孢子表面,相互交叉、重疊混合生長。4、脂肪乳早期可能通過上調(diào)大腸桿菌flhDC、iha,白色念珠菌HTA1、hwp1表達(dá)而促進(jìn)E.coil-Ca混合生物膜的形成。
【關(guān)鍵詞】：中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)性感染 脂肪乳注射液 混合生物膜 熒光原位雜交技術(shù) 生物膜形成相關(guān)基因
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.5;R318.08
【目錄】：

• 主要中英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-14
• 第一部分：構(gòu)建大腸桿菌-白色念珠苗體外生物膜模型14-35
• 材料與方法14-32
• 一、實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 第二部分：不同濃度脂肪乳對(duì)E. coi l-Ca生物膜形成的影響35-67
• —、實(shí)驗(yàn)材料35-37
• 二、實(shí)驗(yàn)方法37-44
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理44-45
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-64
• 討論64-67
• 結(jié)論67
• 本課題研究的創(chuàng)新性67
• 本課題進(jìn)一步的研究問題67-68
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 文獻(xiàn)綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 在讀期間參與科研項(xiàng)目情況82
• 在讀期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83

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