發(fā)布時(shí)間：2017-10-08 07:21

  本文關(guān)鍵詞：骨髓源性側(cè)群細(xì)胞的體外增殖及其向肝樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的 1．通過(guò)觀察BMSP在體外培養(yǎng)條件下能否保持側(cè)群細(xì)胞的特性，以探討B(tài)MSP在體外擴(kuò)增的可能性。 2．觀察在HGF定向誘導(dǎo)下大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化的情況，初步探討HGF在大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞中發(fā)揮的作用及機(jī)制。 方法 1．從大鼠的股骨和脛腓骨分離骨髓細(xì)胞并制備骨髓細(xì)胞懸液，通過(guò)流式細(xì)胞儀分選獲取BMSP；用低糖DMEM㧏10％胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSP。采用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中ABCG-2基因表達(dá)水平。 2．在體外向BMSP中加入不同濃度的HGF誘導(dǎo)其向肝樣細(xì)胞分化，并分別于第3、7、14、21天，通過(guò)RT-PCR、免疫印跡法等技術(shù)檢測(cè)AFP、ALB等細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。 結(jié)果 1．每只SD大鼠的雙側(cè)股骨和脛腓骨所制備的骨髓細(xì)胞懸液的細(xì)胞總數(shù)約2-10×108個(gè)，經(jīng)分選可獲得5-10×105個(gè)BMSP。 2．BMSP在體外培養(yǎng)6小時(shí)后開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)以長(zhǎng)梭形為主。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示第7天細(xì)胞數(shù)量最多，以后進(jìn)入平臺(tái)期。第7天細(xì)胞按1:2傳代培養(yǎng)，傳代后細(xì)胞于24小時(shí)內(nèi)完全貼壁，細(xì)胞傳至第10代時(shí)，細(xì)胞增殖能力仍然很強(qiáng)。 3．誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明：一定濃度的HGF具有明顯的促進(jìn)BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)顯示：培養(yǎng)第3天的BMSP空白組及因子組未見(jiàn)AFP、ALB mRNA表達(dá)；AFP mRNA在第7天的因子組表達(dá)、ALB mRNA在因子組則不表達(dá)，空白組AFP、ALB mRNA均未表達(dá)；AFP mRNA在第14天的因子組表達(dá)減弱、ALB mRNA在第14天的因子組表達(dá)，空白組AFP、ALB mRNA均未表達(dá)；第21天因子組見(jiàn)AFP mRNA不表達(dá)、ALB mRNA表達(dá)減弱，空白組AFP、ALB mRNA均未表達(dá)。因子組與對(duì)照組相比有顯著性差異，P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1．通過(guò)流式細(xì)胞儀分選獲得BMSP在一定時(shí)間內(nèi)可以在體外擴(kuò)增并保持干細(xì)胞的特性，，且傳代的BMSP仍具有很強(qiáng)的自我更新和增殖能力。 2．?dāng)U增的BMSP在HGF的誘導(dǎo)下可以逐漸向肝樣細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：骨髓源性側(cè)群細(xì)胞 干細(xì)胞 流式細(xì)胞分選術(shù) 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 第一部分 骨髓源性側(cè)群細(xì)胞的分選、體外增殖培養(yǎng)及鑒定13-29
• 前言13
• 1．材料與方法13-21
• 2．結(jié)果21-26
• 3．討論26-29
• 第二部分 骨髓源性側(cè)群細(xì)胞向肝樣細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化29-46
• 前言29
• 1．材料與方法29-36
• 2．結(jié)果36-43
• 3．討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 致謝65-66
• 作者簡(jiǎn)介66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 王文靜;韋曦;;側(cè)群細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

2 劉海光;張?bào)泸?潘貽飛;郭貴龍;胡孝渠;黃卡特;;SW480側(cè)群細(xì)胞分選及其ABCG2的檢測(cè)[J];中華腫瘤防治雜志;2008年10期

3 殷波;劉崗;張輝;李明;隋文印;宋永勝;;人前列腺癌細(xì)胞系DU 145中腫瘤干細(xì)胞樣側(cè)群細(xì)胞的分離[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年06期

4 楊再峰,邵健忠,項(xiàng)黎新,周慶軍,張銘,陸永良,姚行,戴利成;一種新型干細(xì)胞——側(cè)群細(xì)胞[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2005年02期

5 展玉濤;畢春山;;肝臟卵圓細(xì)胞[J];世界華人消化雜志;2003年11期

6 鄧?guó)Q;李聯(lián);張?zhí)m華;;ABCG2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究進(jìn)展[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2009年06期

7 姚鵬;;干細(xì)胞在肝臟疾病治療中的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2007年06期

8 姜潤(rùn)德,李春海;從肝臟的組織再生理解肝細(xì)胞癌的產(chǎn)生[J];中華肝膽外科雜志;2002年06期

本文編號(hào)：992709