本文關鍵詞：LIF慢病毒載體的構建及其在骨髓間充質干細胞中的穩(wěn)定表達

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【摘要】：目的：將LIF基因在體外轉染轉染于骨髓間充質干細胞，轉染成功后通過測試，以確定LIF能否在轉染后的骨髓間充質干細胞中穩(wěn)定表達，以促進周圍神經(jīng)再生，減少疤痕。 方法：（1）大鼠骨髓間充質干細胞分離提取，原代培養(yǎng)及表型鑒定，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞，在倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)并繪制其生長曲線，用流式細胞儀測定表面標記對骨髓間充質干細胞進行鑒定。（2）LIF慢病毒載體的構建、包裝。（3）LIF慢病毒載體在骨髓間充質干細胞中轉染，用ELISA檢測LIF基因及蛋白表達水平。 結果：（1）骨髓間充質干細胞成功的從一周齡大鼠骨髓血內分離出，，其鏡下表現(xiàn)為成纖維細胞樣生長，可以向成脂、成骨細胞轉化，通過流式細胞儀檢測，其表面標記物CD44，CD90表達均為陽性，而CD34，CD45表達全部為陰性；（3）通過ELISA法進行了蛋白鑒定，目的基因大鼠LIF在骨髓間充質干細胞中得到了穩(wěn)定表達。 結論： LIF基因片段通過脂質體與慢病毒載體相連，將其轉染于體外培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞，發(fā)現(xiàn)LIF基因可以在骨髓間充質干細胞內得到持續(xù)、穩(wěn)定的表達。研究證明LIF對損傷神經(jīng)損傷修復有重要作用，特別是對軸突的生長有極大的促進作用。LIF慢病毒載體構建成功，LIF在局部持續(xù)、穩(wěn)定的表達，為神經(jīng)損傷的修復開辟了新途徑，為進行下一步動物試驗奠定了基礎。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 LIF 慢病毒載體
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 英文縮略語7-8
• 前言8-9
• 文獻綜述9-22
• 摘要9
• 1 周圍神經(jīng)損傷與再生9-13
• 2 神經(jīng)營養(yǎng)因子13-17
• 3 間充質干細胞17-21
• 4 展望21-22
• 實驗研究22-35
• 1 大鼠骨髓干細胞的提取、分離、培養(yǎng)及鑒定22-31
• 1.1 實驗材料22-25
• 1.2 實驗方法25-27
• 1.3 實驗結果27-31
• 2 LIF基因轉染于骨髓間充質干細胞及檢測31-35
• 2.1 實驗材料31-32
• 2.2 實驗方法32-33
• 2.3 實驗結果33-35
• 討論35-37
• 結語37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-46

【共引文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 崔明亮;心內膜下移植骨髓單個核細胞和間充質干細胞對豬急性心肌梗死療效的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

2 項永生;強化表達VEGF的骨髓基質細胞系的構建及其鑒定[D];南方醫(yī)科大學;2013年

3 姜南;大鼠坐骨神經(jīng)橫斷后近遠端神經(jīng)基因表達和生物學進程分析的對比研究[D];吉林大學;2014年

本文編號：973573