本文關(guān)鍵詞：大鼠腎小球分離和離體培養(yǎng)方法的建立

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【摘要】：本文旨在建立大鼠腎小球分離和離體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法。應(yīng)用差異過(guò)篩法分離技術(shù)分離大鼠腎小球,用Ⅳ型膠原酶消化法去除Bowman囊,用相差顯微鏡觀察腎小球純度和形態(tài)結(jié)構(gòu),臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)腎小球的活性,雙標(biāo)免疫熒光技術(shù)鑒定腎小球固有細(xì)胞的標(biāo)志蛋白nephrin和α-SMA的表達(dá)分布,熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀檢測(cè)Ang Ⅱ?qū)﹄x體培養(yǎng)腎小球ROS水平的影響,real-time PCR方法觀察離體培養(yǎng)的腎小球中TGF-β1 mRNA和collagen Ⅳ mRNA的水平。結(jié)果顯示,離體培養(yǎng)的腎小球結(jié)構(gòu)完整,無(wú)包囊,毛細(xì)血管袢結(jié)構(gòu)清晰;離體培養(yǎng)48 h后,腎小球內(nèi)細(xì)胞仍具有活性;激光共聚焦顯微鏡下可見(jiàn)腎小球內(nèi)足細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白nephrin和α-SMA表達(dá)清晰;給予離體培養(yǎng)的腎小球Ang Ⅱ刺激后,腎小球ROS的產(chǎn)生明顯增加,TGF-β1和collagen Ⅳ mRNA水平升高。以上結(jié)果提示,大鼠腎小球的分離及離體培養(yǎng)技術(shù)建立成功,該分離方法獲得的腎小球可以進(jìn)行離體培養(yǎng)及藥物作用觀察,為基礎(chǔ)和臨床研究提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)和研究手段。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院生理與病理生理學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 大鼠腎小球 腎小球分離 離體培養(yǎng)
【基金】：supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81470591,81170636)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 腎單位是腎臟尿生成的基本功能單位,由腎小μm,由大量的毛細(xì)血管袢組成,似一團(tuán)相互分支又球和腎小管組成,腎小球是原尿生成的部位,具有吻合的血管團(tuán),毛細(xì)血管袢外又被腎小囊(Bowman’s獨(dú)特的結(jié)構(gòu)。腎小球形似球形,直徑約為150~250capsule)所包被[1]。腎小球具有濾過(guò)血漿成分生

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：941612