本文關(guān)鍵詞：攜Apoptin和PEG3啟動子雙特異性重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的利用凋亡素基因(Apoptin)和進行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)構(gòu)建具有特異性殺傷和特異性復制功能的雙特異性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,為研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗腫瘤作用奠定基礎(chǔ)。方法從pMT-E1a和pIRES-neo獲得目的基因E1a和PolyA并連接入pKS-PEG3p,用XhoⅠ和SpeⅠ雙酶切后連接入pAd-Apoptin,獲得穿梭載體pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a。用pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a和腺病毒骨架質(zhì)粒(pAd5)共轉(zhuǎn)染HEK293細胞,獲得重組腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,利用RT-PCR、Western blot和電鏡對重組病毒進行鑒定,采用MTS檢測病毒對A549細胞的抑制效果及其對L02細胞的影響;通過繪制一步生長曲線,檢測重組毒在細胞內(nèi)的復制情況。結(jié)果構(gòu)建的重組病毒基因組中含有Apoptin目的基因,電鏡下具有正常形態(tài)。MTS檢測重組腺病毒對A549細胞的抑制作用具有時效和量效關(guān)系(P0.05),抑制作用在100MOI、96h時達峰值為(79.84±1.0)%,對正常細胞L02無顯著影響,該雙特異性重組腺病毒能夠在A549腫瘤細胞內(nèi)復制,在L02細胞內(nèi)幾乎無復制能力。結(jié)論成功包裝重組腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,且該病毒具有腫瘤特異性殺傷和腫瘤特異性復制功能。
【作者單位】： 延邊大學醫(yī)學院;軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人獸共患病預防與控制重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 重組腺病毒 Apoptin 進行性增量基因 特異性 抗腫瘤
【分類號】：R373
【正文快照】： 腺病毒(adenovirus,Adv)是一種無囊膜的雙鏈DNA病毒,基因組大小約為36kb[1]。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)的人腺病毒有100多種血清型,其中用于人類腫瘤基因治療的多為人5型腺病毒�；蛑委熞蚩赡孓D(zhuǎn)腫瘤細胞表型或誘導細胞自我毀滅而備受關(guān)注,病毒療法為其中的主要領(lǐng)域[2-3]。RAPAd.Ⅰ腺

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本文編號：936177