本文關(guān)鍵詞：人源抗BLyS單鏈抗體的篩選及其構(gòu)建與表達(dá)

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【摘要】：目的:從人源單鏈抗體庫(kù)中篩選抗B細(xì)胞刺激因子(BLy S)的單鏈抗體基因、構(gòu)建表達(dá)載體并實(shí)現(xiàn)單鏈抗體的表達(dá)。方法:以哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示型人源Sc Fv抗體庫(kù)為起始文庫(kù),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分選,獲得熒光強(qiáng)度最強(qiáng)、比例為0.1%的陽(yáng)性細(xì)胞。從候選細(xì)胞中提取質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化至DH5α中進(jìn)行擴(kuò)增,得到質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞作為下一輪篩選所需的抗體庫(kù)。經(jīng)過(guò)依次降低抗原濃度進(jìn)行了3輪分選得到2個(gè)候選的Sc Fv序列。經(jīng)序列分析,選擇其中一種單鏈抗體基因,利用基因工程技術(shù)構(gòu)建分泌型表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293E細(xì)胞并通過(guò)鎳親和層析純化獲得B-10 Sc Fv抗體蛋白并通過(guò)Fortie Bio Octet QK進(jìn)行親和力分析。結(jié)果:經(jīng)過(guò)3輪篩選獲得了全新的抗BLy S Sc Fv抗體序列,成功構(gòu)建并表達(dá)了anti-Bly S Sc Fv抗體蛋白,該單鏈抗體與的BLy S親和常數(shù)為3.08 nmol·L-1。結(jié)論:從哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示型人源Sc Fv抗體庫(kù)中成功獲得了可結(jié)合BLy S的全新單鏈抗體基因序列,該單鏈抗體與BLy S具有較高的親和力,這為后續(xù)的活性研究以及產(chǎn)品開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： B細(xì)胞 B細(xì)胞刺激因子 哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示型人源ScFv抗體庫(kù) 單鏈抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81272701)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： B淋巴細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLy S,也被稱為BAFF)最早于1999年由Moore等多個(gè)研究小組獨(dú)立發(fā)現(xiàn)的一種全新的、具有重要免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子[1-2]。BLy S屬于腫瘤壞死因子(tumour necrosis factor,TNF)超家族成員,是一個(gè)典型的II型跨膜單鏈糖蛋白。BLy S由28

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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4 林婧;重癥肌無(wú)力危象患者血清IL-17水平及其臨床意義研究[D];華中科技大學(xué);2013年

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7 劉嬋;microRNA-630對(duì)IgA腎病人腭扁桃體TLR4及低糖基化IgA1表達(dá)的作用研究[D];中南大學(xué);2014年

8 王俊英;靶向卵巢癌TEM1的特異性成像和免疫治療[D];吉林大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 毛怡心;EV71人源化特異性單克隆抗體分泌細(xì)胞篩選方法的建立及優(yōu)化[D];北京工業(yè)大學(xué);2013年

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5 王玉燕;玉米赤霉烯酮單克隆抗體的制備及噬菌體單鏈抗體的篩選[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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7 張晶;哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示型人源ScFv抗體庫(kù)構(gòu)建及靶向ErbB3 ScFv篩選[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 司進(jìn),朱蔭昌,曹利民,王曉婷,梁幼生,管曉虹;抗弓形蟲主要表面抗原1單鏈抗體的篩選及鑒定[J];中國(guó)血吸蟲病防治雜志;2005年03期

2 程小峰;張佳鍇;孟慶宇;黃小平;范鑫;莊國(guó)洪;;抗人死亡受體5單鏈抗體特性分析[J];免疫學(xué)雜志;2011年01期

3 秦海艷;毛曉燕;喬玉玲;李曉進(jìn);趙紅;;單鏈抗體的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年04期

4 吳沁航;王彤;張_";張娟;王e

本文編號(hào)：924220