本文關(guān)鍵詞：橫川后殖吸蟲(chóng)與扇棘單睪吸蟲(chóng)雙重PCR鑒別方法的建立

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【摘要】：目的建立一種能快速鑒定橫川后殖吸蟲(chóng)(Metagonimus yokogawai)和扇棘單睪吸蟲(chóng)(Haplorchis taichui)的雙重PCR方法。方法從Gen Bank中獲取橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng)以及與其同源性較高的蟲(chóng)種的核糖體DNA第一內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS1)序列,應(yīng)用Primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物,并優(yōu)化PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,建立雙重PCR法。將橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng)與17個(gè)相關(guān)蟲(chóng)種一起進(jìn)行PCR擴(kuò)增,檢測(cè)方法的特異性。橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng)的ITS1擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)p MD19-T載體進(jìn)行TA克隆獲得質(zhì)粒,并將質(zhì)粒進(jìn)行梯度稀釋,檢測(cè)其敏感性。應(yīng)用新建的雙重PCR法鑒定從47副貓內(nèi)臟和40副犬內(nèi)臟中收集的吸蟲(chóng),檢測(cè)該方法的準(zhǔn)確性和實(shí)用性。結(jié)果新建的雙重PCR法能擴(kuò)增出橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng)的目的片段,大小分別為648 bp和279 bp,不與鉤棘單睪吸蟲(chóng)、華支睪吸蟲(chóng)、心形咽口吸蟲(chóng)、次睪屬吸蟲(chóng)囊蚴、外睪屬吸蟲(chóng)囊蚴、藐小棘隙吸蟲(chóng)、抱莖棘隙吸蟲(chóng)、弗氏棘口吸蟲(chóng)、似錐低頸吸蟲(chóng)、全冠屬吸蟲(chóng)、重盤屬吸蟲(chóng)、異尖屬線蟲(chóng)、東方次睪吸蟲(chóng)、衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)、瓦氏瓦生吸蟲(chóng)、背孔屬吸蟲(chóng)和宮脂屬線蟲(chóng)的DNA發(fā)生交叉擴(kuò)增,具有較好的特異性。敏感性試驗(yàn)表明,應(yīng)用該雙重PCR法,2類吸蟲(chóng)DNA的最低檢測(cè)值分別為1.49×10-1pg和1.14×10-1pg。對(duì)來(lái)自貓內(nèi)臟和犬內(nèi)臟的吸蟲(chóng)檢測(cè)表明,該方法能夠區(qū)分橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng),并且不與貓、狗中其他的吸蟲(chóng)DNA發(fā)生交叉擴(kuò)增。結(jié)論本研究所建立的雙重PCR法可用于快速鑒定橫川后殖吸蟲(chóng)和扇棘單睪吸蟲(chóng)。
【作者單位】： 廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;上海出入境檢驗(yàn)檢疫局;廣西大學(xué)食品安全研究中心;羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 橫川后殖吸蟲(chóng) 扇棘單睪吸蟲(chóng) 雙重PCR 鑒別
【基金】：上海出入境檢驗(yàn)檢疫局科研項(xiàng)目(No.HK002-2014) 國(guó)家質(zhì)檢總局科技專項(xiàng)(No.2010IK013)~~
【分類號(hào)】：R383.2
【正文快照】： (1 College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China;2 ShanghaiEntry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People’s Republic of China,Shanghai 200135,China;3 Research Center of Food Quality and Safety,Guangxi Univer

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：921968