本文關(guān)鍵詞：與雪旺細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討非接觸共培養(yǎng)條件下,大鼠SCs對脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的誘導(dǎo)分化效應(yīng),為神經(jīng)組織工程尋找理想種子細(xì)胞提供參考。方法取新生1~2 d SD大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng),酶消化法分離培養(yǎng)SCs,并行S-100免疫熒光染色鑒定。取成年雄性SD大鼠腹股溝和腹膜后脂肪組織,差速貼壁法純化獲得ADSCs并傳代,流式細(xì)胞儀檢測第3代細(xì)胞表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105。取原代SCs和第3代ADSCs按2∶1比例于Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)共培養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)組),以單純培養(yǎng)ADSCs作為對照組。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,培養(yǎng)14 d流式細(xì)胞儀檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表達(dá),免疫熒光染色觀察微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、神經(jīng)元核蛋白(neuronal nuclei protein,Neu N)和膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)神經(jīng)元特異性標(biāo)志物表達(dá)情況,并計(jì)算陽性細(xì)胞率。結(jié)果成功分離培養(yǎng)ADSCs并能連續(xù)傳代,流式細(xì)胞儀檢測示其高表達(dá)CD29、CD90、CD73和CD105,低表達(dá)CD34和CD45。倒置相差顯微鏡下見,實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)后原本呈梭形的ADSCs以胞核為中心收縮,胞體折光性增強(qiáng),胞體伸出多個(gè)長而粗的突起;對照組ADSCs形態(tài)無顯著變化。流式細(xì)胞儀及免疫熒光染色示,共培養(yǎng)后14 d實(shí)驗(yàn)組均表達(dá)神經(jīng)元特異性標(biāo)志物NSE、MAP2、Neu N、GFAP,且陽性細(xì)胞率顯著高于對照組(P0.01)。結(jié)論 SCs與ADSCs非接觸共培養(yǎng),兩者不僅能夠共生,且SCs能顯著促進(jìn)ADSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院骨科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生裝備研究所;武警后勤學(xué)院附屬腦科醫(yī)院腦系;
【關(guān)鍵詞】： 神經(jīng)組織工程 雪旺細(xì)胞 脂肪來源干細(xì)胞 共培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(81101362;11102235)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 神經(jīng)損傷修復(fù)是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域難題,組織工程技術(shù)為其提供了新思路,如何大量獲取神經(jīng)元成為組織工程技術(shù)治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)鍵[1]。Woodbury等[2]首先利用β-巰基乙醇、DMSO和丁基羥基苯甲醚作為神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞,但分化后的細(xì)胞不夠穩(wěn)定,約6 d后開始死

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本文編號：897147