本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌ClpP1重組蛋白的特性探討及初步應(yīng)用

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【摘要】：目的用純化結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重組蛋白免疫新西蘭白兔制備ClpP1多克隆抗體并檢測(cè)其效價(jià),間接ELISA法分析重組蛋白的抗原性,以初步評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值。方法通過SDS-PAGE確定ClpP1重組蛋白的主要表達(dá)形式,利用純化包涵體方式對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化;將純化蛋白免疫新西蘭白兔制備ClpP1多克隆抗體并檢測(cè)其效價(jià);再分別以純化蛋白為抗原,制備抗體為一抗,間接ELISA法檢測(cè)臨床診斷結(jié)核病患者血清中抗M.tb抗體和M.tb抗原。結(jié)果 SDSPAGE顯示ClpP1重組蛋白主要以包涵體表達(dá)形式存在,將純化蛋白免疫新西蘭白兔4次,取血測(cè)抗體效價(jià)為1∶64 000;Western blot結(jié)果顯示制備抗體可較好的與ClpP1蛋白特異性結(jié)合;間接ELISA法結(jié)果表明,以重組蛋白為抗原測(cè)患者血清中抗M.tb抗體和以制備抗體為一抗測(cè)血清中的M.tb抗原的2實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比均具有顯著性差異。結(jié)論制備了具有免疫原性的M.tb ClpP1重組蛋白及效價(jià)較高的多克隆抗體,并得出ClpP1多克隆抗體具有較好的免疫反應(yīng)性,為進(jìn)一步研究ClpP1重組蛋白的特性及其應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 ClpP重組蛋白 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(81101216)
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核病(tuberculosis,TB)是由M.tb引起的人獸共患慢性傳染病,它一直是一個(gè)全球性問題,每年可造成約140萬人死亡,目前對(duì)M.tb的致病機(jī)制仍不是十分清楚[1]。M.tb基因可編碼142種蛋白酶,主要包括FtsH、蛋白酶體和Clp蛋白酶家族[2],其中絲氨酸蛋白水解酶(Caseinolytic protease,Cl

【參考文獻(xiàn)】

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1 謝維欣;武建明;李杰;方永志;王洪梅;何洪彬;;腸道病毒71 VP1基因的原核表達(dá)及其抗血清的制備[J];免疫學(xué)雜志;2013年01期

2 楊雅;劉耀;李，

本文編號(hào)：877607